ما هي المكونات الهيكلية الخاصة للمجهر الفلوري؟
تعد كتلة مرشح الألوان جزءًا مهمًا من المجهر الفلوري، وتتكون مكوناتها الأساسية من مرشح الحاجز الأول لضوء الإثارة، ومرشح الحاجز الثاني للضوء المنبعث، ومرآة تقسيم الشعاع. غالبًا ما تكون نماذج مرشح الألوان وأسماء الشركات المصنعة المختلفة غير متناسقة.
1. مرشح ضوء الإثارة ومرشح ضوء الانبعاث: استنادًا إلى خصائص مصدر الضوء وصبغة الفلورسنت، عادةً ما يتم اختيار الأنواع الثلاثة التالية من المطابقة لتوفير ضوء الإثارة ضمن نطاق طول موجي معين والسماح للتألق المثار بواسطة العينة بالمرور والوصول إلى العدسة للتصوير.
إثارة الأشعة فوق البنفسجية: يمكن لمرشح ضوء الإثارة أن يسمح للضوء فوق البنفسجي بالمرور ويمنع الضوء المرئي الذي يزيد عن 400 نانومتر من المرور. يسمح مرشح الضوء الانبعاثي المقابل بمرور الضوء الأزرق، ويظهر الضوء في مجال الرؤية باللون الأزرق، كما هو الحال عند تطبيقه على تلطيخ DAPI.
إثارة الضوء الأزرق: يمكن لمرشح الضوء المثير أن يسمح للضوء الأزرق بالمرور ويحجب الضوء من الأطوال الموجية الأخرى. يسمح مرشح ضوء الانبعاث المقابل بمرور الضوء الأخضر، مثل علامات تلطيخ GFP.
إثارة الضوء الأخضر: يسمح مرشح الضوء المثير للضوء الأخضر بالمرور ويحجب الضوء من الأطوال الموجية الأخرى. عادةً ما يسمح مرشح الضوء المنبعث المقابل بمرور الضوء الأحمر، مثل تلوين رودامين.
2. مرشح الألوان شبه الشفاف وشبه العاكس: وظيفته هي منع مرور ضوء الإثارة بالكامل وعكسه؛ وينبعث منها الضوء ضمن نطاق الطول الموجي المقابل. نموذجها يتوافق مع مرشح ضوء الإثارة ومرشح ضوء الانبعاث.
(2) العدسة الشيئية والعدسة العينية
يمكن تطبيق عدسات موضوعية مختلفة، ولكن من الأفضل اختيار العدسات ذات المقياس الإضافي وتقليل الانحراف اللوني، حيث أن تألقها الذاتي منخفض للغاية وأداء نقل الضوء الخاص بها (نطاق الطول الموجي) مناسب للتألق. نظرًا لحقيقة أن سطوع الصورة الفلورية في مجال المجهر يتناسب طرديًا مع مربع نسبة فتحة العدسة الموضوعية ويتناسب عكسيًا مع تكبيرها، فمن أجل تحسين سطوع الصور الفلورية، يجب استخدام عدسة موضوعية ذات نسبة فتحة أكبر. خاصة بالنسبة للعينات ذات الفلورية غير الكافية، يجب استخدام عدسة موضوعية ذات نسبة فتحة عالية ونفاذية ضوء عالية، مصحوبة بعدسة عينية بأقل تكبير ممكن.
(3) الأجهزة البصرية الأخرى
عادة ما تكون الطبقة العاكسة للمرآة مطلية بالألومنيوم لأن الألومنيوم يمتص قدرًا أقل من الأشعة فوق البنفسجية والضوء المرئي في المنطقة الزرقاء الأرجوانية، مما يعكس أكثر من 90٪ (بينما تتمتع الفضة بانعكاسية تبلغ 70٪ فقط). بشكل عام، يتم استخدام المرايا المسطحة. عدسة التركيز، المصممة والمصنعة خصيصًا للمجاهر الفلورية، مصنوعة من زجاج الكوارتز أو أي زجاج آخر ينقل الضوء فوق البنفسجي. جهاز الضوء المتساقط، بالإضافة إلى وظيفة مصدر الضوء الناقل، هو أكثر ملاءمة للمراقبة المباشرة للعينات المعتمة وشبه الشفافة، مثل الصفائح السميكة، وأغشية المرشح، والمستعمرات البكتيرية، ومزارع الأنسجة، والعينات الأخرى. في السنوات الأخيرة، تم تطوير العديد من الأنواع الجديدة من المجاهر الفلورية باستخدام جهاز الضوء الساقط، المعروف باسم مجهر الضوء الساقط الفلوري.
(4) مصدر الضوء
في الوقت الحاضر، تُستخدم مصابيح الزئبق ذات الضغط العالي-التي تبلغ 50 أو 100 واط بشكل شائع كمصادر للضوء. أثناء التشغيل، يحدث تفريغ بين قطبين كهربائيين، مما يتسبب في تبخر الزئبق وزيادة الضغط داخل الكرة بسرعة (تستغرق هذه العملية عادة حوالي 5-15 دقيقة). خلال هذه العملية، تنبعث الكمات الضوئية، ويكون الطول الموجي للضوء المنطلق كافيًا لإثارة مواد الفلورسنت المختلفة. ولذلك، فإنه يستخدم على نطاق واسع في المجاهر مضان.
عمر خدمة مصابيح الزئبق قصير نسبيًا، وعادةً ما يصل إلى 200 ساعة. استجابةً لهذا القيد في عمر الخدمة، في السنوات الأخيرة، تم استخدام نوع جديد من مصدر ضوء الفلورسنت X-Cite على نطاق واسع مع عمر لمبة طويل للغاية يصل إلى 2000 ساعة واستخدام مرن - لا يتطلب التسخين المسبق، جاهز للاستخدام.
