متطلبات إعداد شرائح المجهر الفلوري
(1) شريحة زجاجية
يجب أن يتراوح سمك الشريحة بين 0.8 و1.2 ملم. إذا كانت الشريحة سميكة جدًا، فمن ناحية، سوف تمتص المزيد من الضوء، ومن ناحية أخرى، لن تسمح لضوء الإثارة بالتجمع على العينة. يجب أن تكون الشريحة الزجاجية ناعمة، وموحدة في السمك، ولا تحتوي على فلورة تلقائية واضحة. في بعض الأحيان تكون هناك حاجة إلى شرائح زجاج الكوارتز.
(2) تغطية الشريحة الزجاجية
يبلغ سمك زجاج الغطاء حوالي 0.17 ملم وهو أملس. من أجل تعزيز ضوء الإثارة، يمكن أيضًا استخدام زجاج غطاء التداخل. هذا عبارة عن غطاء زجاجي مصمم خصيصًا مع عدة طبقات من المواد (مثل فلوريد المغنيسيوم) التي لها تأثيرات تداخل مختلفة على الضوء بأطوال موجية مختلفة. يمكن أن يسمح للفلورة بالمرور بسلاسة، في حين أن ضوء الإثارة الانعكاسي يمكن أن يثير العينة.
(3) العينة
لا ينبغي أن تكون شرائح الأنسجة أو العينات الأخرى سميكة جدًا. إذا كانت سميكة للغاية، يتم استهلاك معظم ضوء الإثارة في الجزء السفلي من العينة، في حين أن الجزء العلوي الذي يتم مراقبته مباشرة بواسطة العدسة الموضوعية لا يكون متحمسًا بالكامل. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يؤثر تداخل الخلايا أو إخفاء الشوائب على الحكم.
(4) عامل الختم
يستخدم الجلسرين بشكل شائع كعامل تركيب، والذي يجب ألا يحتوي على فلورة تلقائية، ويكون عديم اللون وشفافًا. يكون سطوع الفلورسنت ساطعًا نسبيًا عند الرقم الهيدروجيني 8.5-9.5 وليس من السهل أن يتلاشى بسرعة. لذلك، يتم استخدام خليط متساوٍ من الجلسرين و0.5mol/L من كربونات العازلة مع الرقم الهيدروجيني 9.0-9.5 بشكل شائع كعامل مانع للتسرب.
(5) زيت المرآة
عند استخدام مجهر مضان ذو مجال مظلم ومجهر زيتي لمراقبة العينات، يجب استخدام زيت المرآة. يمكن استخدام زيت مرآة خاص غير فلورسنت، أو يمكن استخدام الجلسرين كبديل. يمكن أيضًا استخدام البارافين السائل، لكن معامل الانكسار منخفض وله تأثير طفيف على جودة الصورة.
