تحضير ومراقبة العينات البيولوجية للمجهر الإلكتروني
تعتمد دقة المجهر على الطول الموجي للضوء المستخدم. يستخدم المجهر الإلكتروني ، الذي بدأ يظهر في عام 1933 ، شعاع الإلكترون بطول موجة أقصر بكثير من الضوء المرئي كمصدر للضوء ، بحيث يتم تحسين الدقة التي يمكن أن تحققها بشكل كبير مقارنة بالجهاز المجهر البصري. يحدد الاختلاف في مصادر الضوء أيضًا سلسلة من الاختلافات بين المجاهر الإلكترونية والمجاهر الضوئية.
وفقا للاختلافات في مبادئ التصوير بشعاع الإلكترون واختلاف طرق العمل على العينات، تطورت المجاهر الإلكترونية الحديثة إلى أنواع عديدة. حاليًا ، أكثرها استخدامًا هي المجاهر الإلكترونية للإرسال ومسح المجاهر الإلكترونية. يمكن أن يكون التكبير الكلي للأولى بين 1000-1000000. يمكن أن يتراوح التكبير الإجمالي للأخير بين 20 و300 000 مرة. تقدم هذه التجربة بشكل رئيسي إعداد نوعين من عينات المجهر، المجهر الإلكتروني النافذ والمجهر الإلكتروني الماسح.
2. المعدات
1. بكتيريا الإشريكية القولونية (الإشريكية القولونية) المائلة.
2. محلول أو كاشف أسيتات الأميل، حمض الكبريتيك المركز، إيثانول مطلق، ماء معقم، 2% فوسفوتنغستات الصوديوم (pH 6.5-8.0) محلول مائي، 0.3% بولي إيثيلين محلول الفورمالديهايد (قابل للذوبان في الكلوروفورم)، خلايا الصباغ ج، خلات الأمونيوم، البلازميد pBR322.
3. الأدوات أو الأدوات الأخرى: المجهر الضوئي العادي، الشبكة النحاسية، قمع الخزف، الكأس، الطبق، القطارة المعقمة، الملقط المعقم، الدبابيس، الشرائح، لوحة العد، آلة طلاء الفراغ، مجفف النقاط الحرجة، إلخ.
3. خطوات التشغيل
(1) تحضير العينة ومراقبتها من أجل الفحص المجهري الإلكتروني
1. معالجة الشبكات المعدنية
يتم وضع عينة المجهر البصري على شريحة زجاجية للمراقبة. ومع ذلك، في المجهر الإلكتروني النافذ، نظرًا لعدم قدرة الإلكترونات على اختراق الصفيحة الزجاجية، يمكن استخدام المواد الشبكية فقط كحاملات، وتسمى عادةً شبكات حاملة. يمكن تقسيم الشبكة الحاملة إلى العديد من المواصفات المختلفة نظرًا لاختلاف المواد والأشكال، ومن بينها الأكثر استخدامًا 200-400 شبكة (عدد الثقوب) شبكة نحاسية. يجب معالجة الشبكة النحاسية قبل الاستخدام لإزالة الأوساخ والحفاظ عليها نظيفة، وإلا فإنها ستؤثر على جودة فيلم الدعم ووضوح صور العينة. تستخدم هذه التجربة شبكة نحاسية 400- ، والتي يمكن معالجتها على النحو التالي: أولاً ، نقعها وتبيّنها مع خلات الأميل لعدة ساعات ، ثم شطفها بالماء المقطر عدة مرات ، ثم نقعها في الإيثانول المطلق من أجل تجفيف. إذا كانت شبكة النحاس لا تزال غير نظيفة بعد الطرق المذكورة أعلاه ، فيمكنك نقعها في حمض الكبريتيك المركب المخفف (1: 1) لمدة دقيقة إلى دقيقتين ، أو تغليها في محلول NaOH 1 ٪ لبضع دقائق الماء عدة مرات ، ثم وضعه في الجفاف اللامائي في الإيثانول وتوضع جانبا.
2. إعداد غشاء الدعم
عند مراقبة العينات، يجب أيضًا تغطية الشبكة الحاملة بطبقة من فيلم موحد غير منظم، وإلا فسوف تتسرب العينات الصغيرة من فتحات الشبكة الحاملة. يُطلق على هذا الفيلم عادةً اسم الفيلم الداعم أو الفيلم الناقل. يجب أن يكون الفيلم الداعم شفافًا إلكترونيًا، ويجب أن يكون سمكه عمومًا أقل من 20 نانومتر؛ تحت تأثير شعاع الإلكترون، يجب أن يكون للفيلم أيضًا قوة ميكانيكية معينة للحفاظ على الاستقرار الهيكلي والتوصيل الحراري الجيد؛ بالإضافة إلى ذلك، يجب استخدام شبكة الدعم في المجهر الإلكتروني. يجب ألا يكون هناك أي هيكل مرئي تحتها، ولا يوجد تفاعل كيميائي مع العينة المحمولة، ولا يوجد تداخل مع مراقبة العينة. يبلغ سمكها عمومًا حوالي 15 نانومتر. يمكن أن يكون الفيلم الداعم عبارة عن فيلم بلاستيكي (مثل فيلم الكولوديون، أو فيلم البولي إيثيلين فورمالدهايد، وما إلى ذلك)، أو فيلم كربون أو فيلم معدني (مثل فيلم البريليوم، وما إلى ذلك). في ظل ظروف العمل العادية، يمكن للفيلم البلاستيكي تلبية المتطلبات. من بين الأفلام البلاستيكية، من السهل نسبيًا تحضير فيلم الكولوديون، لكن قوته ليست جيدة مثل فيلم البولي إيثيلين فورمالدهايد.
