كيف يختلف المجهر الفلوري عن الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر
المجهر الفلوري
1. يستخدم المجهر الفلوري الضوء فوق البنفسجي كمصدر للضوء لإضاءة الجسم الذي يتم فحصه لجعله ينبعث منه الفلورة، ومن ثم مراقبة شكل وموقع الجسم تحت المجهر. يُستخدم المجهر الفلوري لدراسة امتصاص المواد ونقلها داخل الخلايا، بالإضافة إلى توزيع المواد الكيميائية وتحديد موضعها. يمكن لبعض المواد الموجودة في الخلايا، مثل الكلوروفيل، أن تتألق بعد تعريضها للأشعة فوق البنفسجية. بعض المواد نفسها لا يمكنها التألق، ولكن إذا كانت ملطخة بأصباغ الفلورسنت أو الأجسام المضادة الفلورية، فإنها يمكن أن تتألق بعد التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية. يعد الفحص المجهري الفلوري أحد أدوات البحث النوعي والكمي حول هذه المواد.
2. مبدأ المجهر الفلوري:
(أ) مصدر الضوء: مصدر الضوء يشع الضوء بأطوال موجية مختلفة (من الأشعة فوق البنفسجية إلى الأشعة تحت الحمراء).
(ب) مصدر ضوء مرشح الإثارة: ينقل الضوء ذو الطول الموجي المحدد الذي يمكن أن يتسبب في تألق العينة، بينما يحجب الضوء الذي لا فائدة منه لتحفيز الفلورسنت.
(ج) عينات الفلورسنت: ملطخة عموما بأصباغ الفلورسنت.
(د) مرشح الحجب: يحجب ضوء الإثارة الذي لا تمتصه العينة وينقل الفلورة بشكل انتقائي. يتم أيضًا نقل بعض الأطوال الموجية في التألق بشكل انتقائي. مجهر يستخدم الضوء فوق البنفسجي كمصدر للضوء ليتسبب في تألق الجسم المضاء. تم تجميع المجهر الإلكتروني لأول مرة في عام 1931 في برلين بألمانيا على يد كنور وهالوسكا. يستخدم هذا المجهر شعاعًا إلكترونيًا عالي السرعة بدلاً من شعاع الضوء. نظرًا لأن الطول الموجي لتدفق الإلكترون أقصر بكثير من طول موجة الضوء، فإن تكبير المجهر الإلكتروني يمكن أن يصل إلى 800,000 مرة، والحد الأدنى للدقة هو 0.2 نانومتر. يسمح المجهر الإلكتروني الماسح، الذي بدأ استخدامه في عام 1963، للناس برؤية الهياكل الصغيرة الموجودة على سطح الأشياء.
3. نطاق التطبيق: يستخدم لتكبير صور الأشياء الصغيرة. يستخدم بشكل عام في مراقبة علم الأحياء، والطب، والجسيمات المجهرية، وما إلى ذلك.
مجهر متحد البؤر
1. يضيف المجهر متحد البؤر شبه عدسة شبه عاكسة إلى المسار البصري للضوء المنعكس، مما يؤدي إلى انكسار الضوء المنعكس الذي مر عبر العدسة إلى اتجاهات أخرى. يوجد حاجز به ثقب في بؤرته، ويوجد الثقب في النقطة المحورية، خلف الحاجز، يوجد أنبوب مضاعف ضوئي. يمكن تخيل أن الضوء المنعكس قبل وبعد تركيز ضوء الكشف يمر عبر هذا النظام البؤري ولا يمكن تركيزه على الثقب الصغير، وسيتم حظره بواسطة الحاجز. إذن ما يقيسه مقياس الضوء هو شدة الضوء المنعكس عند التركيز.
2. المبدأ: تستخدم المجاهر الضوئية التقليدية مصادر الضوء الميدانية، وسوف تتداخل صورة كل نقطة على العينة عن طريق الحيود أو الضوء المتناثر من النقاط المجاورة؛ تستخدم المجاهر متحد البؤر المسح بالليزر أشعة الليزر لتشكيل مصادر ضوء نقطية من خلال ثقوب مضيئة لإضاءة الجزء الداخلي من العينة. يتم مسح كل نقطة من المستوى البؤري، ويتم تصوير النقطة المضيئة على العينة عند ثقب الكشف، والتي يتم استقبالها نقطة تلو الأخرى أو سطرًا تلو الآخر بواسطة أنبوب المضاعف الضوئي (PMT) أو جهاز الاقتران البارد (cCCD) خلف الكشف الثقب، وبسرعة تتشكل صورة فلورية على شاشة شاشة الكمبيوتر. ثقب الإضاءة وثقب الكشف مترافقان بالنسبة إلى المستوى البؤري للعدسة الموضوعية. وتتركز النقاط على المستوى البؤري على ثقب الإضاءة وثقب الانبعاث في نفس الوقت. لن يتم تصوير نقاط خارج المستوى البؤري عند ثقب الكشف. يتم الحصول على الصور متحد البؤر وهي عبارة عن مقاطع عرضية بصرية للعينات، مما يتغلب على عيوب الصور الباهتة في المجاهر العادية.
3. مجالات التطبيق: تشمل الطب، البحوث العلمية الحيوانية والنباتية، الكيمياء الحيوية، علم الجراثيم، بيولوجيا الخلية، علم أجنة الأنسجة، علوم الأغذية، علم الوراثة، علم الصيدلة، علم وظائف الأعضاء، البصريات، علم الأمراض، علم النبات، علم الأعصاب، علم الأحياء البحرية، وعلم المواد، العلوم الإلكترونية ، الميكانيكا، جيولوجيا البترول، علم المعادن.
