طريقة الكشف المجهري مضان
المجهر الفلوري
المجهر الفلوري هو أداة أساسية للكيمياء الخلوية المناعية. إنه يتكون من مكونات رئيسية مثل مصدر الضوء، نظام لوحة الترشيح، والنظام البصري. يستخدم طولًا موجيًا معينًا من الضوء لإثارة العينة وإصدار مضان، والذي يتم تضخيمه من خلال نظام موضوعي وعدسة عينية لمراقبة صورة مضان العينة (الشكل 1).
(1) مصدر الضوء
في الوقت الحاضر، يتم استخدام مصباح الزئبق ذو الضغط العالي 200W بشكل شائع كمصدر للضوء. وهو مصنوع من زجاج الكوارتز، ذو شكل كروي في المنتصف ومملوء بداخله كمية معينة من الزئبق. أثناء التشغيل، يؤدي التفريغ بين القطبين إلى تبخر الزئبق، ويزداد الضغط داخل الكرة بسرعة. عندما يتبخر الزئبق تمامًا، يمكن أن يصل إلى 50-70 ضغط جوي قياسي، والذي يستغرق عمومًا حوالي 5-15 دقيقة. إن تألق مصابيح الزئبق ذات الضغط العالي للغاية هو نتيجة التفريغ بين الأقطاب الكهربائية، التي تنفصل بشكل مستمر وتقلل من جزيئات الزئبق وتنبعث منها الفوتونات. ينبعث منها ضوء قوي من الأشعة فوق البنفسجية والبنفسجية الزرقاء، وهو ما يكفي لإثارة مواد الفلورسنت المختلفة، لذلك، يستخدم على نطاق واسع في المجاهر الفلورية.
احتياطات استخدام المجهر الفلوري
(1) اتبع بدقة تعليمات مصنع المجهر الفلوري ولا تغير البرنامج بشكل تعسفي.
(2) ينبغي إجراء التفتيش في غرفة مظلمة. بعد دخول الغرفة المظلمة، قم بتوصيل الطاقة وإشعال مصباح الزئبق عالي الضغط لمدة 5-15 دقيقة. بعد أن ينبعث مصدر الضوء ضوءًا قويًا ويستقر، يجب أن تتكيف العيون تمامًا مع الغرفة المظلمة قبل البدء في مراقبة العينة.
(3) لمنع أضرار الأشعة فوق البنفسجية للعينين، يجب ارتداء نظارات واقية عند ضبط مصدر الضوء.
(4) يجب أن تكون مدة الفحص 1-2 ساعة في كل مرة. إذا تجاوزت 90 دقيقة، فإن شدة الإضاءة لمصباح الزئبق عالي الضغط تتناقص تدريجيًا ويضعف الفلورسنت؛ العينات المعرضة للأشعة فوق البنفسجية لمدة 3-5 يوم
بعد دقيقة، كما انخفض الأسفار بشكل ملحوظ؛ لذلك، يجب ألا تتجاوز المدة القصوى 2-3 ساعة.
(5) عمر مصدر ضوء المجهر الفلوريسنت محدود، ويجب فحص العينة مركزيًا لتوفير الوقت
توفير الوقت وحماية مصدر الضوء. عندما يكون الجو حارا، يجب إضافة مروحة كهربائية لتبديد الحرارة والتبريد. عند استبدال مصباح كهربائي جديد، يجب تسجيل وقت الاستخدام من البداية. عند إطفاء الضوء والرغبة في استخدامه مرة أخرى، يجب عليك الانتظار حتى يبرد المصباح بدرجة كافية قبل إشعاله. تجنب إضاءة مصدر الضوء عدة مرات في اليوم.
(6) مراقبة العينة مباشرة بعد تلطيخ، كما الأسفار سوف تضعف تدريجيا مع مرور الوقت. إذا تم تخزين العينة في كيس من البلاستيك البولي ايثيلين عند 4 درجة، فإنه يمكن تأخير وقت التوهين مضان ومنع تبخر عامل التركيب.
(7) تنقسم معايير الحكم على سطوع الفلورسنت عمومًا إلى أربعة مستويات، وهي "واحد" - لا يوجد أو فلورة ضعيفة مرئية. "+" - يكون الفلورسنت المرئي فقط هو المرئي. ++- مرئي مع مضان ساطع. "+++" - مضان مرئي ومبهر.
