أي نوع من المجهر يستخدم لمعرفة شكل الخلايا الميكروبية
مصطلح جماعي لجميع الكائنات الدقيقة التي يصعب على الأفراد ملاحظتها بالعين المجردة. تشمل الكائنات الحية الدقيقة البكتيريا والفيروسات والفطريات وبعض الطحالب. (ومع ذلك ، فإن بعض الكائنات الحية الدقيقة يمكن رؤيتها بالعين المجردة ، مثل الفطر الذي ينتمي إلى الفطريات ، والجانوديرما لوسيدوم ، وما إلى ذلك) الفيروسات هي نوع من "الكائنات غير الخلوية" تتكون من عدد قليل من المكونات مثل الأحماض النووية والبروتينات ، ولكن يجب أن يعتمد البقاء على قيد الحياة على الخلايا الحية. وفقًا للبيئات المختلفة الموجودة ، يمكن تقسيمها إلى كائنات دقيقة بدائية النواة ، وكائنات دقيقة في الفضاء ، وكائنات دقيقة فطرية ، وكائنات دقيقة من الخميرة ، وكائنات دقيقة بحرية ، وما إلى ذلك.
دور وضرر الكائنات الحية الدقيقة:
من أهم تأثيرات الكائنات الحية الدقيقة على الإنسان انتشار الأمراض المعدية. 50٪ من الأمراض التي تصيب الإنسان تسببها الفيروسات. تاريخ الميكروبات المسببة للأمراض البشرية هو تاريخ صراع البشر المستمر معها. لقد حقق البشر تقدمًا كبيرًا في الوقاية من الأمراض وعلاجها ، ولكن لا تزال تحدث عدوى جرثومية جديدة وعودة للظهور ، مثل عدد كبير من الأمراض الفيروسية التي تفتقر إلى الأدوية العلاجية الفعالة. الآلية المسببة للأمراض لبعض الأمراض غير واضحة. تسبب تعاطي عدد كبير من المضادات الحيوية واسعة النطاق في ضغط اختيار قوي ، مما تسبب في تحور العديد من السلالات ، مما أدى إلى ظهور مقاومة للأدوية ، وصحة الإنسان مهددة من قبل التهديدات الجديدة. يمكن لبعض الفيروسات المجزأة أن تتحور من خلال إعادة التركيب أو إعادة التجميع. المثال الأكثر شيوعًا هو فيروس الأنفلونزا.
بعد معرفة التعريف المحدد للكائنات الدقيقة ، ما هو نوع الميكروسكوب الذي يجب على المجرب استخدامه عند دراسة الكائنات الحية الدقيقة ليراها ، وما هو المجهر الذي يمكن استخدامه لرؤية أفضل ، ولمراقبة وتحليل الأشكال الميكروبية الشائعة.
اختراع المجهر هو أن يكون قادرًا على رؤية الأشياء المبتسمة التي لا يمكن رؤيتها بالعين المجردة. حجم الكائنات الحية الدقيقة صغير جدًا ، لذا يجب تكبيرها ومراقبتها بمساعدة المجهر. بالإضافة إلى ذلك ، هناك العديد من أنواع الكائنات الحية الدقيقة ، لذلك يمكن لمعظم المجاهر الضوئية بشكل أساسي مراقبة الكائنات الدقيقة ، والسؤال التالي هو ما هو نوع المجهر الذي يجب استخدامه لمراقبة الكائنات الحية الدقيقة وتحليلها. تشمل المجاهر الشائعة لمراقبة التشكل الميكروبي المجاهر البيولوجية ، ومجاهر تباين الطور ، والمجاهر المقلوبة ، ومجاهر التألق ، والمجاهر متحد البؤر. المجهر وهلم جرا.
فيما يلي وصف للمجاهر المختلفة المستخدمة لمراقبة الكائنات الحية الدقيقة:
1. مجهر ضوئي عادي
يستخدم الضوء الطبيعي أو الضوء كمصدر للضوء ، ويبلغ طوله الموجي حوالي {{0}} .4 ميكرومتر. دقة المجهر هي نصف الطول الموجي ، أي 0. 2 ميكرومتر ، وأصغر صورة مرئية للعين المجردة هي 0. 2 مم. لذلك ، فإن استخدام مرآة الزيت (الغمر) لتكبير 1 0 00 مرة يمكن أن يكبر جسيمات 0.2 ميكرومتر إلى 0.2 مم مرئية للعين المجردة. يمكن استخدام المجاهر الضوئية العادية لمراقبة البكتيريا والفطريات الشعاعية والفطريات.
2. يستخدم الفحص المجهري Darkfield بشكل شائع لمراقبة التشكل الميكروبي غير الملوث والحركة. بعد تثبيت مكثف المجال المظلم في المجهر العادي ، لا يمكن للضوء أن يخترق مباشرة من الوسط ، ويكون مجال الرؤية مظلمًا. عندما تتلقى العينة ضوءًا مائلًا من حافة المكثف ، يمكن أن تتناثر ، لذلك يمكن ملاحظة الكائنات الحية الدقيقة الساطعة في خلفية الحقل المظلمة مثل البكتيريا أو اللولبيات.
3. مجهر تباين الطور يستخدم مجهر تباين الطور تأثير الضوء للوحة فرق الطور لتغيير طور الضوء وسعة الضوء المباشر ، وتحويل اختلاف طور الضوء إلى فرق شدة الضوء. تحت مجهر تباين الطور ، عندما يمر الضوء عبر عينة غير ملوثة ، فإن الاختلاف في طور الضوء ناتج عن عدم تناسق كثافة الأجزاء المختلفة للعينة ، ويمكن ملاحظة التشكل والبنية الداخلية ونمط الحركة للكائنات الحية الدقيقة.
4. مجهر الإسفار هو في الأساس نفس المجهر الضوئي العادي ، والفرق الرئيسي هو مصدر الضوء والمرشح والمكثف. في الوقت الحاضر ، يستخدم معظمهم أجهزة epi-light ، وتشيع استخدام مصابيح الزئبق عالية الضغط كمصادر للضوء ، والتي يمكن أن تنبعث منها ضوء فوق بنفسجي أو أزرق بنفسجي. هناك نوعان من المرشحات: مرشح الإثارة وفلتر الامتصاص. بالإضافة إلى مكثفات المجال الساطع العامة ، يمكن أيضًا استخدام مكثفات المجال المظلم في مجاهر التألق باستخدام الضوء الأزرق لتعزيز التباين بين التألق والخلفية. هذه الطريقة قابلة للتطبيق لاكتشاف أو تحديد البكتيريا الملطخة بأصباغ الفلورسنت أو مجتمعة مع الأجسام المضادة الفلورية.
5. تستخدم المجاهر الإلكترونية تدفق الإلكترون كمصدر للضوء. بالمقارنة مع الضوء المرئي ، يختلف الطول الموجي بعشرات الآلاف من المرات ، مما يحسن الدقة بشكل كبير. يتم استخدام الملف المغناطيسي كنظام تضخيم ضوئي ، ويمكن أن يصل التكبير إلى عشرات الآلاف أو مئات الآلاف من المرات. غالبًا ما يستخدم في جزيئات الفيروس. ومراقبة البنية التحتية البكتيرية.
مراقبة العينات الميكروبية غير الملوثة:
يمكن استخدام العينات غير الملوثة بشكل عام لمراقبة مورفولوجيا البكتيريا وقوتها وحركتها. تكون البكتيريا عديمة اللون وشفافة عندما تكون غير ملوثة ، ويتم ملاحظتها تحت المجهر بشكل أساسي من خلال الاختلاف بين معامل الانكسار للبكتيريا والبيئة المحيطة. تتحرك البكتيريا ذات الأسواط بقوة ، بينما تظهر البكتيريا التي لا تحتوي على أسواط حركة براونية غير منتظمة. تمتلك البكتيريا القابلة للحياة مثل اللولبية الشاحبة ، و Leptospira ، و Campylobacter أشكالًا وأنماط حركة مميزة ، وهي ذات أهمية تشخيصية. الطرق الشائعة الاستخدام هي طريقة إسقاط الضغط وطريقة إسقاط القلادة وطريقة الشعيرات الدموية.
1. طريقة الإسقاط المعلق ضع الفازلين حول الفتحة المقعرة للشريحة الزجاجية النظيفة المقعرة ، خذ حلقة من التعليق البكتيري بحلقة تلقيح وضعها في وسط زجاج الغطاء ، ثم قم بمحاذاة الفتحة المقعرة للشريحة الزجاجية المقعرة مع القطرة في منتصف زجاج الغطاء وضع الغطاء ، ثم اقلبه بسرعة ، واضغط برفق على زلة الغطاء لجعله يلتصق بإحكام بالفازلين على حافة الفتحة المقعرة ، ثم راقب تحت قوة عالية مجهر (أو حقل مظلم).
2. خذ حلقة من التعليق البكتيري بحلقة تلقيح وضعها في وسط شريحة زجاجية نظيفة بطريقة إسقاط الضغط ، وقم بتغطية التعليق البكتيري برفق بغطاء زجاجي ، مع الحرص على تجنب تكوّن فقاعات الهواء ومنع التعليق البكتيري من الفيضان. برايت فيلد (أو حقل مظلم) تحت عدسة عالية الطاقة.
3. الطريقة الشعرية تستخدم بشكل رئيسي لفحص حركية البكتيريا اللاهوائية. عادة ما تختار 6 0 ~ 7 0 مم. بعد سحب معلق البكتيريا اللاهوائية من خلال أنبوب شعري بفتحة 0. 5-1 0 مم ، أغلق طرفي الشعيرات الدموية بلهب. تم تثبيت الشعيرات الدموية على شريحة زجاجية بورق بلاستيكي ، وتم ملاحظتها تحت عدسة عالية الطاقة في مجال مظلم.
مراقبة العينات الميكروبية الملطخة بالمجهر:
بعد تلطيخ العينة البكتيرية ، بسبب التباين الحاد في اللون بين البكتيريا والبيئة المحيطة ، يمكن أن تكون الخصائص المورفولوجية للبكتيريا (مثل الحجم والشكل والترتيب وما إلى ذلك) للبكتيريا وبعض الهياكل الخاصة لوحظ بوضوح تحت المجهر الضوئي العادي (مثل الكبسولات ، الأسواط ، الجراثيم ، إلخ) ، ويمكن تصنيف البكتيريا وتحديدها وفقًا لتفاعل التلوين.
(1) الإجراء العام للتلوين البكتيري الإجراء العام للتلوين البكتيري هو: مسحة (تجفيف) - تثبيت - تلطيخ.
1. مسحة تحضير الدم ، والإفرازات ، والإفرازات ، وثقب السائل ، وثقبة السائل ، وطبقة رقيقة مباشرة على الشرائح الزجاجية ؛ تشريح الجثة أو الأنسجة الحيوانية المصابة ، تشويه الآفة بمسحة قطنية لأخذ العينات. لتحضير المستعمرات البكتيرية أو المروج على وسط صلب ، استخدم أولاً حلقة التلقيح لأخذ حلقة من محلول ملحي عادي وضعها في وسط الشريحة ، ثم استخدم حلقة تلقيح معقمة لأخذ كمية صغيرة من المزرعة وطحنها بالتساوي في محلول ملحي عادي ، وانشره إلى 1 سم 2 على الأسطح المطلية الكبيرة أو الصغيرة ، اتركه يجف بشكل طبيعي في درجة حرارة الغرفة أو يجف ببطء على مسافة.
2. الغرض من التثبيت هو قتل البكتيريا ، تخثر البروتين والبنية البكتيرية ، وتسهيل تلطيخها. تشجيع البكتيريا على الالتصاق بالشريحة لتجنب غسلها بالماء أثناء الغسيل ؛ تغيير نفاذية البكتيريا إلى الأصباغ ، وهو أمر مفيد لتكوين الخلايا البكتيرية للتلطيخ. عادة ما يتم إصلاحه عن طريق التسخين باللهب ، ويتم تمرير اللطاخة المجففة بسرعة عبر اللهب لمدة 3 مرات. من الأفضل عدم حرق الجلد على ظهر اليد عندما يلمس الشريحة.
3. الصباغة وفقًا لأغراض الفحص المختلفة ، اختر طرقًا مختلفة للصباغة. عند الصباغة ، أضف محلول الصبغة بالتنقيط لزيادة التغطية.
4. Mordant أي مادة يمكن أن تعزز التقارب بين الصبغة والشيء المصبوغ ، وتثبيت الصبغة على الجسم المصبوغ وتسبب تغييرًا في نفاذية غشاء الخلية تسمى مادة حادة. يشيع استخدام الشب وحمض التانيك والأملاح المعدنية واليود وما إلى ذلك ، كما يستخدم التسخين لتعزيز التلوين. يمكن استخدام Mordants بين التلوين الأساسي والتلوين المضاد ، ويمكن أيضًا استخدامه بعد التثبيت أو احتوائه في التثبيت والتلطيخ.
5. إزالة اللون أي عامل كيميائي يمكنه إزالة لون الكائن المصبوغ يسمى مزيل اللون. يشيع استخدام الإيثانول والأسيتون وما إلى ذلك كمزيلات للألوان. يمكن لعامل إزالة اللون أن يكتشف درجة ثبات تركيبة البكتيريا والأصباغ ، والتي يمكن استخدامها للتلوين التفاضلي.
6. غالبًا ما يتم مقاومة البكتيريا أو هياكلها التي تم إزالة اللون منها بمحلول مضاد لسهولة الملاحظة. يختلف لون محلول الصبغة المضادة عن لون محلول الصباغة الأساسي لتشكيل تباين حاد. يجب ألا يكون الطلاء المضاد قويًا جدًا ، حتى لا يغطي لون التلوين الأولي.
