الغرض من المجهر الفلوري وصفاته واستخدامه
المبدأ والخصائص الهيكلية لمجهر التألق: يستخدم المجهر الفلوري مصدر ضوء نقطي ذو كفاءة إضاءة عالية لإصدار طول موجي معين من الضوء (مثل الضوء فوق البنفسجي 3650 أو الضوء الأزرق الأرجواني 4200 بوصة) من خلال نظام المرشح كإثارة الضوء لتحفيز التألق في العينة. بعد أن تصدر المادة فلورة بألوان مختلفة ، يتم ملاحظتها من خلال تكبير العدسة الشيئية والعدسة العينية. بهذه الطريقة ، في ظل خلفية تباين قوية ، حتى لو كان التألق ضعيفًا جدًا ، فمن السهل تحديده ولديه حساسية عالية. يستخدم بشكل أساسي في البحث عن بنية الخلية ووظيفتها والتركيب الكيميائي. يتكون الهيكل الأساسي لمجهر التألق من مجهر بصري عادي بالإضافة إلى بعض الملحقات (مثل مصدر الضوء الفلوري ، ومرشح الإثارة ، وموزع شعاع ثنائي اللون ومرشح مانع ، إلخ). مصدر الضوء الفلوريسنت - يستخدم بشكل عام مصباح زئبقي عالي الضغط (50-200 W) ، والذي يمكن أن ينبعث منه ضوء بأطوال موجية مختلفة ، ولكن كل مادة فلورية لها طول موجة إثارة ينتج أقوى وميض ، لذلك مرشح الإثارة (بشكل عام ، هناك مرشحات إثارة للأشعة فوق البنفسجية والأرجوانية والأزرق والأخضر) ، والتي تسمح فقط لضوء الإثارة بطول موجي معين بالمرور عبر العينة وإشعاعها ، بينما تمتص الضوء الآخر. بعد أن يتم تشعيع كل مادة بضوء الإثارة ، فإنها تصدر وميضًا مرئيًا بطول موجة أطول من الطول الموجي للإشعاع في وقت قصير جدًا. الإسفار محدد وهو أضعف عمومًا من ضوء الإثارة. من أجل مراقبة الفلورة المحددة ، يلزم وجود مرشح حجب (أو قمع) خلف العدسة الشيئية.
لها وظيفتان: إحداهما امتصاص وحجب ضوء الإثارة من دخول العدسة ، حتى لا تزعج التألق وتتلف العينين ؛ والآخر هو تحديد الفلورة المحددة والسماح لها بالمرور ، مع إظهار لون الفلورسنت المحدد. يجب استخدام المرشحتين معًا.
هناك نوعان من المجاهر الفلورية من حيث مساراتها البصرية:
1. مجهر الإرسال الفلوري: يتم تمرير مصدر ضوء الإثارة عبر مادة العينة من خلال عدسة مكثف لإثارة التألق. يتم استخدام جامع المجال المظلم بشكل شائع ، ويمكن أيضًا استخدام جامع عادي لضبط المرآة بحيث يتم إعادة توجيه ضوء الإثارة وتجاوزه إلى العينة. هذا مجهر فلورسنت أقدم. الميزة هي أن التألق قوي عند التكبير المنخفض ، ولكن العيب هو أن التألق يتناقص مع زيادة التكبير. لذلك ، من الأفضل مراقبة مواد العينات الأكبر حجمًا.
2. مجهر Epi-fluorescence هو نوع جديد من مجهر مضان تم تطويره في العصر الحديث. الفرق هو أن ضوء الإثارة يسقط من العدسة الشيئية إلى سطح العينة ، أي أن نفس العدسة الشيئية تستخدم كمكثف الإضاءة والعدسة الموضوعية لتجميع التألق. يجب إضافة فاصل شعاع مزدوج اللون في مسار الضوء ، والذي يبعد 45 درجة عن اليورانيوم الخفيف. ينعكس ضوء الإثارة على العدسة الموضوعية ويتم جمعه على العينة. الفلورة الناتجة عن العينة وضوء الإثارة المنعكس على سطح العدسة للعدسة الموضوعية وسطح الغطاء الزجاجي يدخلان العدسة الشيئية في نفس الوقت ، ويعودان إلى شعاع الشعاع ذي اللونين لجعل ضوء الإثارة منفصلاً عن التألق ، يتم امتصاص ضوء الإثارة المتبقي عن طريق حجب المرشحات. مثل التغيير إلى مزيج من مرشح الإثارة المختلفة / مرشح / مرشح شعاع ثنائي اللون ، يمكن أن يلبي احتياجات منتجات تفاعل الفلورسنت المختلفة. ميزة هذا النوع من المجهر الفلوري هي أن إضاءة مجال الرؤية موحدة ، والتصوير واضح ، وكلما زاد التكبير ، كان التألق أقوى.
(2) كيفية استخدام مجهر التألق.
1. قم بتشغيل مصدر الضوء ، ويحتاج مصباح الزئبق عالي الضغط إلى التسخين لبضع دقائق للوصول إلى النقطة الأكثر سطوعًا.
2. يحتاج مجهر النقل الفلوري إلى تثبيت مرشح الإثارة المطلوب بين مصدر الضوء والمكثف ، وتثبيت مرشح الحجب المقابل خلف العدسة الشيئية. تحتاج مجاهر Epi-fluorescence إلى إدخال مرشح الإثارة المطلوب / فاصل شعاع ثنائي اللون / مرشح حجب في الفتحات الموجودة في المسار البصري.
3. راقب باستخدام عدسة منخفضة التكبير ، واضبط مركز مصدر الضوء بحيث يقع في وسط بقعة الإضاءة بأكملها وفقًا لجهاز الضبط الخاص بنماذج مختلفة من مجاهر التألق.
4. ضع قطعة العينة ولاحظ بعد التركيز. يجب الانتباه أثناء الاستخدام: لا تراقب المرشح الطرفي مباشرة ، حتى لا تسبب ضررًا للعين ؛ عند مراقبة العينات باستخدام عدسة زيتية ، يجب عليك استخدام عدسة زيت خاصة بدون مضان ؛ بعد إطفاء مصباح الزئبق عالي الضغط ، لا يمكن تشغيله مرة أخرى على الفور ، بل يجب اختباره. يمكن إعادة تشغيله بعد 5 دقائق ، وإلا فإنه سيكون غير مستقر ويؤثر على عمر مصباح الزئبق.
(3) الملاحظة باستخدام مرشح الضوء الأزرق البنفسجي تحت مجهر الفلورسنت على منصة التدريس ، يمكن ملاحظة أن حرف o. 01 في المائة من الخلايا الملطخة بصبغة فلورية برتقالية أكريدين ، تكون النواة والسيتوبلازم متحمسة لإنتاج لونين مختلفين من التألق (الأخضر الداكن والأحمر البرتقالي).
