طريقة تحضير الشرائح المجهرية
1. طريقة تشويه
طريقة التلطيخ هي طريقة لتحضير الشرائح عن طريق طلاء المواد عليها بشكل موحد.
تشتمل مواد اللطاخة على الكائنات الحية ذات الخلية الواحدة، والطحالب الصغيرة، والدم، ووسائط زراعة البكتيريا، والأنسجة الرخوة للحيوانات والنباتات، والخصيتين، والمتك، وما إلى ذلك.
عند التلطيخ يجب الانتباه إلى:
(1) يجب تنظيف الشريحة الزجاجية.
(2) يجب أن تكون الشريحة الزجاجية مسطحة.
(3) يجب أن يكون الطلاء موحدًا. ضع القطرة على يمين منتصف الشريحة الزجاجية ووزعها بالتساوي باستخدام شفرة تشريح أو مسواك.
(4) يجب أن يكون الطلاء رقيقًا. باستخدام شريحة زجاجية أخرى كشريحة، ادفع بلطف من اليمين إلى اليسار على طول سطح الشريحة الزجاجية مع السائل المطبق (يجب أن تكون الزاوية بين الشريحتين 30 درجة إلى 45 درجة)، وقم بتطبيق طبقة رقيقة موحدة.
(5) ثابت. إذا كان التثبيت مطلوبًا، يمكن استخدام المثبتات الكيميائية أو طرق التجفيف (البكتيريا) للتثبيت.
(6) تلطيخ. تستخدم البكتيريا أزرق الميثيلين، ويستخدم الدم محلول رايت للتلوين. يجب أن يغطي محلول التلوين سطح الطلاء بالكامل.
(7) شطف. استخدم ورقًا ماصًا لامتصاصه أو تجفيفه.
(8) ختم الفيلم. الحفاظ على المدى الطويل باستخدام فيلم الشجرة الكندية.
2. طريقة الضغط على الجهاز اللوحي
طريقة الضغط هي طريقة لتقطيع المواد البيولوجية عن طريق وضعها بين شريحة زجاجية وغطاء، مع تطبيق ضغط معين لتفريق خلايا الأنسجة.
العملية العامة لطريقة الضغط على الجهاز اللوحي:
(1) اختيار المواد. لمراقبة انقسام الخلايا، ينبغي اختيار خلايا الأنسجة الطازجة ذات الانقسام الخلوي القوي كمواد. مثل طرف الجذر، ومرستيم طرف الجذع، وخلايا نخاع العظم، والمتك (الخلايا الأم لحبوب اللقاح). أعشاش الحيوانات المنوية (الخلايا المنوية)، الخ.
(٢) ثابت. يمكن تحديد تثبيت المواد وفقًا للاحتياجات، ويجب ضغط العينة ومراقبتها على الفور. ليس من الضروري إجراء علاج تثبيت منفصل (متزامن مع تلطيخ)؛ إذا لم يتم فحص المادة مباشرة بعد أخذ العينات، فيمكن تثبيتها باستخدام مادة مثبتة (عادة مثبت كحول حمض الأسيتيك). بعد التثبيت لمدة 2-24 ساعة (اعتمادًا على المادة)، اشطفه باستخدام 95% من الإيثانول وقم بتخزينه في 70% من الإيثانول لاستخدامه لاحقًا.
(3) الانفصال. يجب معالجة المواد التي لا تتشتت بسهولة بواسطة الخلايا بمحلول فصل التحلل المائي (مثل 1N حمض الهيدروكلوريك أو السائل المنوي لحمض الهيدروكلوريك) لمدة 6-20 دقيقة. بعد التفكك، ينبغي أن تشطف بالماء قبل تلطيخ.
(4) تلطيخ. هناك أنواع عديدة من الأصباغ. عادةً ما يتم تلوين الكروموسومات بمحلول تلطيخ أرجواني بحمض الأسيتيك.
(5) اضغط على الجهاز اللوحي. ضع المادة على شريحة زجاجية، وأضف قطرة ماء أو محلول صبغ، وقم بتغطية الشريحة بغطاء، واضغط عليها برفق بإبهامك.
(6) لاحظ. بعد الضغط يمكن ملاحظتها تحت المجهر.
