الإجراء القياسي لمعايرة المستقطبات في مجهر الاستقطاب
يختلف المجهر الفلوري عن المجهر الضوئي العادي في أنه لا يرصد العينات تحت إضاءة مصادر الضوء العادية. بدلاً من ذلك، يستخدم طولًا موجيًا معينًا من الضوء (عادةً الضوء فوق البنفسجي، الضوء البنفسجي الأزرق) لإثارة المواد الفلورية داخل العينة تحت المجهر، مما يؤدي إلى انبعاث الفلورسنت. ولذلك، فإن دور مصدر الضوء في المجهر الفلوري ليس الإضاءة المباشرة، ولكن كمصدر للطاقة لإثارة المواد الفلورية داخل العينة. السبب وراء تمكننا من ملاحظة العينات لا يرجع إلى إضاءة مصدر الضوء، ولكن ظاهرة الفلورسنت التي تظهرها المواد الفلورية داخل العينة بعد امتصاص الطاقة الضوئية المثارة. من هذا، يمكن ملاحظة أن خاصية الفحص المجهري الفلوري هي بشكل أساسي أن مصدر الضوء الخاص به يمكن أن يوفر كمية كبيرة من ضوء الإثارة في نطاق طول موجي محدد، بحيث يمكن للمواد الفلورية في العينة الحصول على الكثافة اللازمة لضوء الإثارة. وفي الوقت نفسه، يجب أن تحتوي المجاهر الفلورية على أنظمة ترشيح مقابلة. المجهر الفلوري هو أداة أساسية في كيمياء الأنسجة الفلورية. ويتكون من مكونات رئيسية مثل مصدر الضوء فائق الجهد -ونظام الترشيح (بما في ذلك لوحات مرشح الإثارة والقمع)، والنظام البصري، ونظام التصوير الفوتوغرافي. يستخدم ضوءًا بطول موجي معين لإثارة العينة وإصدار مضان.
1. طرق الإثارة الفلورية: وفقًا لنطاق الطول الموجي للضوء، هناك نوعان: طريقة الإثارة فوق البنفسجية (باستخدام الإضاءة فوق البنفسجية) وطريقة الإثارة BV (باستخدام الضوء البنفسجي الأزرق). تستخدم طريقة الإثارة بالأشعة فوق البنفسجية ضوءًا بالقرب من الأشعة فوق البنفسجية أقصر من 400 نانومتر للإثارة. لا تحتوي هذه الطريقة على ضوء إثارة مرئي، لذا يُظهر الفلورسنت المرصود الفلورسنت المتأصل للصبغة، مما يجعل من السهل التمييز بين الفلورسنت المحدد في العينة والفلورسينت الذاتي لأنسجة الخلفية.
2. طريقة الإثارة BV: تتضمن الإثارة من الضوء فوق البنفسجي إلى الضوء الأزرق المتمركز عند 404 نانومتر و434 نانومتر. تستخدم هذه الطريقة الضوء الأزرق لتشعيع العينة، لذلك يجب أن يستخدم مرشح القطع-لنظام مراقبة التألق مرشحًا يمكنه حجب الضوء الأزرق تمامًا والمرور بالكامل عبر التألق الأخضر والأصفر المطلوب. أصباغ الفلورسنت المستخدمة في طريقة الأجسام المضادة الفلورية. الحد الأقصى لطول موجة الامتصاص لضوء الإثارة والحد الأقصى لطول موجة الانبعاث للفلورة قريبان نسبيًا، لذلك يجب أن يستخدم المرشح المستخدم في طريقة الإثارة BV مرشحًا حادًا. يمكن لهذه الطريقة استخدام الضوء الأزرق كضوء إثارة، وبالتالي فإن كفاءة امتصاص أصباغ الفلورسنت عالية، ويمكن الحصول على صور أكثر سطوعًا. العيب هو أنه لا يمكن رؤية التألق تحت 500 نانومتر، في حين أن التألق فوق 500 نانومتر يجعل الصورة بأكملها تظهر باللون الأصفر. في طريقة الأجسام المضادة الفلورية، يتم تحديد الخصوصية في الغالب من خلال اللون الفريد للأصباغ الفلورية، لذلك عند مناقشة الخصوصية الدقيقة، غالبًا ما يكون لعيوب طريقة الإثارة BV المذكورة أعلاه تأثير كبير.
