متطلبات تحضير العينة للفحص المجهري الإسفار
متطلبات تحضير العينة للفحص المجهري الإسفار
(1) شريحة زجاجية
يجب أن يكون سمك الزجاج المنزلق بين 0. 8- L2mm. ستمتص الشريحة السميكة جدًا مزيدًا من الضوء من ناحية ولا يمكنها تركيز ضوء الإثارة على العينة من ناحية أخرى. يجب أن تكون الشرائح ناعمة وموحدة في السُمك وخالية من التألق الذاتي الواضح. في بعض الأحيان يتم استخدام شرائح الكوارتز.
(2) غطاء زجاجي
سماكة زجاج الغطاء حوالي 0. 17 ملم ، أملس. من أجل تقوية ضوء الإثارة ، يمكن أيضًا استخدام زجاج غطاء التداخل ، وهو غطاء زجاجي خاص مغطى بعدة طبقات من المواد (مثل فلوريد المغنيسيوم) التي لها تأثيرات تداخل مختلفة على ضوء الأطوال الموجية المختلفة ، والتي يمكن أن تجعل مضان على نحو سلس. يتم تمرير ضوء الإثارة ، وينعكس ضوء الإثارة ، ويمكن لضوء الإثارة المنعكس هذا أن يثير العينة.
(3) عينة
يجب ألا تكون شرائح الأنسجة أو العينات الأخرى سميكة جدًا. إذا كانت السماكة سميكة جدًا ، فسيتم استهلاك معظم ضوء الإثارة في الجزء السفلي من العينة ، بينما لا يمكن تحفيز الجزء العلوي الذي تمت ملاحظته مباشرة بواسطة العدسة الشيئية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التألق الناجم عن تداخل الخلايا أو الشوائب ، يؤثر تلطيخ الخلفية غير المحدد على الحكم.
(4) زيت المرآة
بشكل عام ، عند مراقبة العينات باستخدام مجاهر تألق المجال المظلم ومجاهر الغمر بالزيت ، يجب استخدام زيت الغمر. من الأفضل استخدام زيت غمر خاص غير فلوري. يمكن أيضًا استخدام الجلسرين بدلاً من ذلك ، ويمكن أيضًا استخدام البارافين السائل ، لكن معامل الانكسار منخفض ، مما يؤثر بشكل طفيف على جودة الصورة.
فهم المكعب الخفيف للميكروسكوب الفلوري
الإسفار هو الضوء الذي تمتصه الإلكترونات في مادة ما الطاقة الضوئية من حالة الطاقة المنخفضة إلى حالة الطاقة العالية ، ثم تطلق الضوء عندما تعود إلى حالة الطاقة المنخفضة. إنه ضوء مشع غير درجة الحرارة - اللمعان. أي: تمتص المادة ضوء الموجة القصيرة ، وتدخل في حالة الإثارة ، وتصدر ضوءًا طويل الموجة.
سواء كان ذلك هو التألق الذاتي للمادة ، أو الصبغة الفلورية ، أو البروتين الفلوري المعبر عنه بالاندماج ، فإنه يحتاج إلى الإثارة بطول موجي معين من الضوء (الإثارة). بعد أن تهاجر الإلكترونات وتفقد الطاقة ، فإنها تبعث ضوءًا بطول موجي طويل محدد (Emision). ، والتي يمكن جمعها عن طريق نظام الكشف لتحقيق وظيفة تحديد الفلورة المحددة.
ما هو مكعب ضوء الفلورسنت؟
في المراقبة والتصوير بالمجهر الفلوري ، يتم توفير ضوء الإثارة لطول موجي محدد وضوء انبعاث الطول الموجي الطويل المقابل بواسطة مكعب الضوء الفلوري ، بحيث يمكن جمع إشارة التألق بالعين المجردة أو شاشة العرض أو الكاميرا. لذلك ، يحدد مكعب الضوء الفلوري ما يمكن اكتشافه الجهاز الرئيسي لإشارة التألق ، وتشمل خصائصه EX: معلمات مرشح الطول الموجي للإثارة ، EM: معلمات مرشح الطول الموجي الانبعاث و DM: معلمات المرآة ثنائية التفرع. خذ المكعب الضوئي DAPI لمجهر الفلورة المدمجة كمثال ، EX: 385/30 ، EM: 450/50 ، DM: 425.
The light emitted by the light source passes through DAPI EX to obtain excitation light in a specific wavelength range, that is, light of 385±15nm, which specifically excites fluorescent substances that can only be excited within this range; the DM dichroic mirror separates the excitation light from the fluorescence Optical elements, as special mirrors, reflect only specific wavelengths of light and allow all other wavelengths to pass through, so only >يمكن إرسال ضوء 425nm إلى EM ؛ تُستخدم مرشحات الانبعاث الكهرومغناطيسي لفصل الفلورة المنبعثة من الفلوروفور عن العناصر البصرية الخلفية الأخرى لفصل الضوء. تنقل مرشحات الانبعاث الضوء بطول موجة الفلورة عبر المرآة ثنائية اللون بينما تحجب جميع الضوء الآخر الذي يتسرب من مصدر ضوء الإثارة (المنعكس من العينة أو البصريات). الطول الموجي للضوء المنبعث أكبر من EM المراد ملاحظته ، أي أن الضوء فقط ضمن نطاق 450 ± 25 نانومتر يدخل في نظام الكشف. يمكن أن يساعد الاختيار الصحيح لمرشحات EX و EM وثنائيات DM الباحثين على تحقيق نسب أعلى للإشارة إلى الضوضاء (S / N).
