متطلبات إنتاج عينات المجهر الفلوري
(1) شريحة زجاجية
يجب أن يتراوح سمك الشريحة بين 0.8 و1.2 ملم. إذا كانت الشريحة سميكة جدًا، فمن ناحية، فإنها تمتص المزيد من الضوء، ومن ناحية أخرى، لا يمكنها أن تتسبب في تجمع ضوء الإثارة على العينة. يجب أن تكون الشريحة ناعمة، وموحدة في السمك، وخالية من الفلورسنت التلقائي الواضح. في بعض الأحيان تكون هناك حاجة إلى شرائح زجاج الكوارتز.
(2) غطاء الشريحة الزجاجية
يبلغ سُمك زجاج الغطاء حوالي 0.17 ملم، وهو ناعم ونظيف. ومن أجل تعزيز الإثارة، يمكن أيضًا استخدام زجاج غطاء التداخل. هذا عبارة عن غطاء زجاجي مصمم خصيصًا مع عدة طبقات من المواد (مثل فلوريد المغنيسيوم) التي لها تأثيرات تداخل مختلفة على أطوال موجية مختلفة من الضوء. يمكن أن يسمح بمرور الفلورسنت بسلاسة، في حين أن إثارة الانعكاس يمكن أن تثير العينة.
(3) العينة
لا ينبغي أن تكون شرائح الأنسجة أو العينات الأخرى سميكة للغاية، حيث يتم استهلاك ضوء الإثارة في الغالب في الجزء السفلي من العينة، في حين أن الجزء العلوي الذي يتم ملاحظته مباشرة بواسطة العدسة الموضوعية ليس متحمسًا بالكامل. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يؤثر تداخل الخلايا أو إخفاء الشوائب على الحكم.
(4) عامل الختم
يستخدم الجلسرين بشكل شائع كعامل تركيب، ويجب أن يكون خاليًا من التألق التلقائي، وعديم اللون وشفاف. يكون سطوع الفلورسنت أكثر سطوعًا عند درجة الحموضة 8.5 ~ 9.5، وليس من السهل أن يتلاشى بسرعة. لذلك، يتم استخدام خليط متساوٍ من الجلسرين و0.5mol/l كربونات عازلة عند درجة حموضة 9.0-9.5 بشكل شائع كعامل مانع للتسرب.
(5) زيت المرآة
عند مراقبة العينات باستخدام مجهر مضان ذو مجال مظلم ومجهر زيتي، فمن الضروري استخدام زيت العدسة. من الأفضل استخدام زيت عدسات غير فلورسنت مصنوع خصيصًا، والذي يمكن أيضًا استبداله بالجلسرين كما هو مذكور أعلاه. يمكن أيضًا استخدام البارافين السائل، لكن معامل الانكسار منخفض وله تأثير طفيف على جودة الصورة.
احتياطات استخدام المجهر الفلوري
(1) اتبع بدقة متطلبات دليل المصنع الخاصة بالمجهر الفلوري ولا تقم بتغيير البرنامج بشكل تعسفي.
(2) ينبغي إجراء التفتيش في غرفة مظلمة. بعد دخول الغرفة المظلمة، قم بتوصيل مصدر الطاقة وأشعل مصباح الزئبق عالي الضغط لمدة 5 إلى 15 دقيقة. بعد أن ينبعث مصدر الضوء ضوءًا قويًا ويستقر، تتكيف العيون تمامًا مع الغرفة المظلمة قبل البدء في مراقبة العينة.
(3) لمنع أضرار الأشعة فوق البنفسجية للعينين، يجب ارتداء نظارات واقية عند ضبط مصدر الضوء.
(4) يجب أن تكون مدة الفحص 1-2 ساعة في كل مرة. إذا تجاوزت 90 دقيقة، فإن شدة الإضاءة لمصباح الزئبق عالي الضغط تتناقص تدريجيًا ويضعف الفلورسنت؛ بعد تعرضها للأشعة فوق البنفسجية لمدة 3-5 دقيقة، انخفض أيضًا فلورية العينة بشكل ملحوظ؛ لذا يجب ألا تتجاوز 2-3 ساعة على الأكثر.
(5) عمر مصدر ضوء المجهر الفلوريسنت محدود، ويجب فحص العينة مركزيًا لتوفير الوقت وحماية مصدر الضوء. عندما يكون الجو حارا، يجب إضافة مروحة كهربائية لتبديد الحرارة والتبريد. عند استبدال مصباح كهربائي جديد، يجب تسجيل وقت الاستخدام من البداية. عند إطفاء المصباح والرغبة في استخدامه مرة أخرى، يجب الانتظار حتى يبرد المصباح تمامًا قبل إشعاله. تجنب إشعال مصدر الضوء عدة مرات.
(6) مراقبة العينة مباشرة بعد تلطيخ، كما يتناقص الأسفار تدريجيا مع مرور الوقت. إذا تم تخزين العينة في كيس من البلاستيك البولي ايثيلين عند 4 درجة، فإنه يمكن تأخير وقت التوهين مضان ومنع تبخر عامل التركيب.
(7) ينقسم معيار الحكم الخاص بسطوع الفلورسنت بشكل عام إلى أربعة مستويات، وهي "واحد" - لا يوجد أو فلورة ضعيفة مرئية. زائد - يمكن رؤية مضان واضح المعالم فقط. زائد زائد - مرئي مع مضان مشرق. 'زائد زائد زائد' - مضان مرئي ومبهر.
