متطلبات تحضير العينات الروتينية للفحص المجهري
المجهر متحد البؤر هو منتج جديد عالي التقنية تم تطويره في الثمانينيات من القرن الماضي ، وهو أحد الأدوات التحليلية المهمة في البيولوجيا الجزيئية وعلوم الحياة اليوم. يعتمد الفحص المجهري متحد البؤر على التصوير المجهري الفلوري مع إضافة جهاز مسح بالليزر ، باستخدام جهاز كمبيوتر لمعالجة الصور للحصول على صور الفلورسنت للبنية المجهرية داخل الخلايا أو الأنسجة ، ولمراقبة التغيرات في مورفولوجيا العديد من آلات الإشارات الفسيولوجية على المستوى دون الخلوي. كن أداة بحث قوية في مجالات علم التشكل وبيولوجيا الخلايا الجزيئية وعلم الأعصاب وعلم العقاقير وعلم الوراثة والمجالات العلمية الأخرى.
إعداد عينة للفحص المجهري (كنفوكل) خطوة حاسمة قبل الكشف. يجب أن يتم تمييز العينات باستخدام مجسات الفلورسنت (مفردة ، مزدوجة ، ثلاثية).
ال
يمكن أن تكون العينات ثابتة أو أنسجة حية ، أو ثقافات ملتصقة ثابتة أو حية. يجب تربيتها الخلايا على أطباق أو أغطية ثقافية صغيرة متحد البؤر. تعليق الخلايا ، وهز أو إسقاط الشرائح ، وتغطيتها بفيلم غطاء ساترة. تبلغ سماكة Zda للعينة حوالي 1 ~ 2 مم ، ويجب أن يكون سمك غطاء الزجاج المستخدم أقل من 0. 17 مم ، ويجب أن يكون سمك الزجاج المنزلق بين 0. 8 ~ 1.2 مم ، والسطح أملس ، وسمكه موحد ، ولا يوجد تداخل واضح في التألق. غالبًا ما يتم استخدام وسيط التركيب للعينات الثابتة ، ويتم تحضير الجلسرين المحضر في برنامج تلفزيوني برقم هيدروجيني 8. 5-9 شائع الاستخدام للتركيب.
متطلبات تحضير العينة الروتينية:
1. اختيار الأصباغ
نظرًا لأن المجهر متحد البؤر يستخدم ليزرًا أحادي الموجة كمصدر للضوء ، يجب أن يعتمد اختيار الأصباغ الفلورية على الطول الموجي لليزر المجهز بالمجهر متحد البؤر. إذا كان هناك العديد من الأصباغ الفلورية في نفس العينة ، فيجب أيضًا مراعاة الطول الموجي للانبعاث قدر الإمكان. لا تتداخل لتجنب مشاكل الألوان المتقاطعة.
2. اختيار عينة الناقل
بشكل عام ، العدسة الموضوعية عالية القدرة للمجهر متحد البؤر هي العدسة الزيتية ، وفتحتها العددية صغيرة ، ولا يلزم أن تكون مسافة العمل بين العدسة والعينة أكثر من 0. 17 مم. الشرائح والأغطية بخير. إذا كانت خلايا معلقة أو جسيمات معلقة ، فيمكن استخدام طبق بتري مخصص لمجهر متحد البؤر لحمل العينة للمراقبة.
3. اختيار وسيلة التركيب
إذا كانت العينة تحتاج إلى الملاحظة مرة واحدة فقط ولم يتم إخماد الفلورة بسهولة ، فيمكنك اختيار تركيز معين من خليط الجلسرين لإغلاق الشريحة. إذا كانت العينة بحاجة إلى وضعها لفترة من الوقت وأخذها عدة مرات ، فيجب اختيار وسيط تصاعد مضاد للتألق لتقليل فقد إشارات الفلورسنت.
