مبادئ المجهر الفلوري
تختلف مجاهر الإسفار عن المجاهر الضوئية العادية. بدلاً من مراقبة العينات تحت إضاءة مصادر الضوء العادية ، يستخدمون ضوءًا بطول موجة معين (عادةً ضوء فوق بنفسجي ، ضوء أزرق بنفسجي) لإثارة المواد الفلورية في العينات تحت المجهر لجعلها تنبعث من الفلورة. لذلك ، لا يعمل مصدر الضوء لمجهر التألق كإضاءة مباشرة ، ولكن كمصدر للطاقة يثير المواد الفلورية داخل العينة. يرجع السبب في إمكانية ملاحظة العينة إلى إضاءة مصدر الضوء ، لكن ظاهرة التألق المقدمة بعد مادة الفلورسنت في العينة تمتص الطاقة الضوئية المثارة.
يمكن ملاحظة أن خاصية المجهر الفلوري هي أن مصدر الضوء الخاص به يمكن أن يوفر كمية كبيرة من ضوء الإثارة في نطاق طول موجي معين ، بحيث يمكن للمادة الفلورية في العينة المختبرة الحصول على ضوء الإثارة بالشدة اللازمة. في الوقت نفسه ، يجب أن يحتوي المجهر الفلوري على نظام التصفية المقابل.
يعد الفحص المجهري الفلوري أداة أساسية في كيمياء الأنسجة المناعية. وهي تتألف من مصدر ضوء فائق الجهد ، ونظام مرشح (بما في ذلك لوحة الترشيح للإثارة والقمع) ، ونظام بصري ونظام تصوير ومكونات رئيسية أخرى. يستخدم ضوءًا بطول موجي معين لإثارة العينة لإصدار التألق.
طريقة إثارة التألق: وفقًا لنطاق الطول الموجي للضوء ، يمكن تقسيمه إلى نوعين: طريقة الإثارة بالأشعة فوق البنفسجية (باستخدام طريقة الإضاءة فوق البنفسجية) وطريقة الإثارة BV (باستخدام الضوء البنفسجي الأزرق). تستخدم طريقة الإثارة فوق البنفسجية ضوءًا قريبًا من الأشعة فوق البنفسجية أقصر من 400 نانومتر للإثارة. لا يوجد ضوء إثارة مرئي في هذه الطريقة ، لذا فإن التألق الملحوظ يقدم التألق المتأصل للصبغة ، ومن السهل التمييز بين التألق المحدد على العينة والتألق الذاتي لنسيج الخلفية.
تعتمد طريقة الإثارة BV على 404 نانومتر و 434 نانومتر للإثارة من الأشعة فوق البنفسجية إلى الضوء الأزرق. تستخدم هذه الطريقة الضوء الأزرق لإشعاع العينة ، لذلك يجب أن يستخدم مرشح القطع لنظام مراقبة التألق مرشحًا يمكنه حجب الضوء الأزرق تمامًا وتمرير التألق الأخضر والأصفر المطلوب بالكامل. الأصباغ الفلورية لفحوصات الأجسام المضادة الفلورية. الطول الموجي الأقصى لامتصاص ضوء الإثارة قريب نسبيًا من الطول الموجي الأقصى لانبعاث التألق ، لذلك يجب أن يستخدم المرشح المستخدم في طريقة الإثارة BV مرشح قطع حاد. يمكن أن تستخدم هذه الطريقة الضوء الأزرق كضوء إثارة ، وبالتالي فإن كفاءة امتصاص الصبغة الفلورية أعلى ، ويمكن الحصول على صورة أكثر إشراقًا. عيبه هو أنه لا يمكن رؤية الفلورة التي تقل عن 500 نانومتر ، كما أن التألق فوق 500 نانومتر يجعل الصورة بأكملها تظهر باللون الأصفر. في طريقة الأجسام المضادة الفلورية ، غالبًا ما يتم الحكم على خصوصية الفلوروكروم من خلال اللون الفريد للفلوروكروم. لذلك ، عند مناقشة الخصوصية الدقيقة ، غالبًا ما يكون لأوجه القصور المذكورة أعلاه في طريقة الإثارة BV تأثير كبير.
باختصار ، يمكن النظر في إضاءة مجهر التألق وفقًا للنقاط الثلاث التالية وفقًا لهيكل المكثف وطول موجة ضوء الإثارة.
① من منظور متطلبات التباين للصورة الفلورية ، يتم استخدام مكثف المجال المظلم لإثارة الأشعة فوق البنفسجية للإضاءة.
بالنظر إلى سطوع الصورة ، يتمتع مرشح الإثارة BV بأعلى كفاءة في مراقبة المجال المظلم.
يمكن اعتبار خصائص مراقبة المجال المظلم لمرشح الأشعة فوق البنفسجية وإضاءة مكثف المجال المظلم بإثارة BV بين هاتين الطريقتين للإضاءة ، ولكن الأولى لها خصائص حقل مظلم أقوى وتعرض صورًا أكثر إشراقًا. التباين صغير. يحتفظ الأخير بخصائص مسار ضوء المجال المظلم ، وبالتالي تكون الصورة المعروضة أغمق ، ويتم تحسين التباين. عند استخدام مجهر مضان فعليًا ، يجب استخدام طريقة الإضاءة التي تناسب متطلبات العينة للمراقبة.
يجب الإشارة إلى أنه حتى إذا كان مكثف المجال المظلم المثير للأشعة فوق البنفسجية مع أفضل تباين مضاء ، فإن جزء من ضوء الإثارة فوق البنفسجي المنكسر أو المبعثر بواسطة العينة سيدخل إلى العدسة الشيئية. يمكن أن يؤدي التألق الذاتي إلى تفاقم استجابة الصورة. لذلك ، يجب استخدام مرشح ماص للأشعة فوق البنفسجية أمام العدسة كمرشح قاطع.
