مبدأ وبناء المجهر الفلوري
يستخدم المجهر الفلوري مصدر ضوء ذو كفاءة عالية في الإضاءة، والذي ينبعث طول موجي معين من الضوء (مثل الضوء فوق البنفسجي 3650 بوصة أو الضوء الأزرق البنفسجي 4200 بوصة) من خلال نظام ترشيح الألوان كضوء إثارة، ويثير المواد الفلورية في العينة إلى تنبعث منها ألوان مختلفة من مضان. بعد ذلك، يتم ملاحظته من خلال تكبير الهدف والعدسة. وبهذه الطريقة، حتى مع التألق الضعيف، يمكن التعرف عليه بسهولة ويكون حساسًا للغاية في ظل خلفيات متباينة قوية، ويستخدم بشكل أساسي لدراسة بنية الخلية ووظيفتها، بالإضافة إلى التركيب الكيميائي. يتكون الهيكل الأساسي للمجهر الفلوري من مجهر ضوئي عادي وبعض الملحقات (مثل مصدر ضوء الفلورسنت، مرشح الإثارة، فاصل الشعاع ثنائي اللون، ومرشح الحجب، وما إلى ذلك). مصادر ضوء الفلورسنت - تستخدم عادة مصابيح الزئبق ذات الضغط العالي للغاية (50-200W)، والتي يمكن أن ينبعث منها ضوء بأطوال موجية مختلفة. ومع ذلك، فإن كل مادة فلورسنت لها طول موجة ضوئية مثيرة تنتج أقوى فلورة، لذلك يلزم إضافة مرشحات الإثارة (عادةً مرشحات الإثارة فوق البنفسجية والأرجوانية والأزرق والأخضر) للسماح فقط بطول موجي معين من ضوء الإثارة بالمرور والإضاءة العينة، في حين تمتص كل الضوء الآخر. بعد تشعيعها بالضوء المثار، تصدر كل مادة مضانًا مرئيًا بطول موجي أطول من التشعيع في فترة زمنية قصيرة جدًا. الإسفار له خصوصية وهو أضعف بشكل عام من ضوء الإثارة. من أجل مراقبة مضان معين، يجب إضافة مرشح حجب (أو قمع) خلف العدسة الموضوعية. لها وظيفتين: أولاً، تمتص وتمنع ضوء الإثارة من الدخول إلى العدسة لتجنب إزعاج الفلورسنت وإتلاف العينين؛ ثانيًا، فهو يختار ويسمح بمرور مضان معين، مما يعرض لونًا محددًا للفلورسنت. يجب تحديد كلا النوعين من المرشحات لاستخدامهما معًا.
هناك نوعان من المجاهر الفلورة بناءً على مسارها البصري:
1. مجهر مضان الإرسال: يتم نقل مصدر ضوء الإثارة من خلال مادة العينة من خلال مكثف لإثارة الفلورة. يمكن استخدام مجمعات ضوء الحقل المظلم شائعة الاستخدام، أو مجمعات الضوء العادية، لضبط العاكس لتحويل ضوء الإثارة والضوء الجانبي إلى العينة. هذا مجهر مضان قديم الطراز نسبيًا. وتتمثل ميزته في أن الفلورسنت قوي عند التكبير المنخفض، في حين أن عيبه هو أن الفلورسنت يضعف مع زيادة التكبير. ولذلك، فمن الأفضل لمراقبة المواد عينة أكبر.
2. المجهر الفلوري ذو الشعاع الساقط هذا نوع جديد من المجهر الفلوري الذي تم تطويره في العصر الحديث. على عكس السابق، يسقط ضوء الإثارة من العدسة الموضوعية إلى سطح العينة، باستخدام نفس العدسة الموضوعية مثل مكثف الإضاءة والعدسة الموضوعية لجمع الفلورة. ويجب إضافة فاصل شعاعي مزدوج اللون إلى المسار البصري، والذي يكون بزاوية 45 درجة بالنسبة لليورانيوم الخفيف. ينعكس ضوء الإثارة في العدسة الشيئية ويتركز على العينة. الأسفار التي تولدها العينة، فضلا عن ضوء الإثارة المنعكس من سطح العدسة الموضوعية وغطاء الزجاج، تدخل العدسة الهدف في وقت واحد والعودة إلى فاصل شعاع مزدوج اللون، ويفصل بين الإثارة والأسفار. يتم بعد ذلك امتصاص الإثارة المتبقية بواسطة مرشح الحجب. إذا تم استخدام مرشحات الإثارة المختلفة/فواصل شعاع اللون المزدوج/مجموعات مرشح الحجب، فيمكنها تلبية احتياجات منتجات تفاعل الفلورسنت المختلفة. تتمثل ميزة هذا المجهر الفلوري في أن مجال إضاءة الرؤية موحد، والتصوير واضح، وكلما زاد التكبير، كلما كان الفلورسنت أقوى.
