مبدأ وتطبيق المجهر الفلوري
(1) المبدأ والخصائص الهيكلية لمجهر التألق: يستخدم المجهر الفلوري مصدر ضوء نقطي ذو كفاءة إضاءة عالية لإصدار ضوء بطول موجي معين (مثل الضوء فوق البنفسجي 3650 أو الضوء الأزرق الأرجواني 4200 بوصة) من خلال نظام المرشح كضوء الإثارة لإثارة العينة. بعد أن تنبعث مادة الفلورسنت بالداخل من ألوان مختلفة ، يتم ملاحظتها من خلال تكبير العدسة الموضوعية والعدسة العينية. بهذه الطريقة ، في ظل خلفية تباين قوية ، حتى لو كان التألق ضعيفًا جدًا ، فمن السهل تحديده ولديه حساسية عالية. يستخدم بشكل أساسي في البحث عن بنية الخلية ووظيفتها والتركيب الكيميائي. يتكون الهيكل الأساسي لمجهر التألق من مجهر بصري عادي بالإضافة إلى بعض الملحقات (مثل مصدر الضوء الفلوري ، ومرشح الإثارة ، وموزع شعاع ثنائي اللون ومرشح مانع ، إلخ). مصدر الضوء الفلوريسنت - يستخدم بشكل عام مصباح زئبقي عالي الضغط (50-200 W) ، والذي يمكن أن ينبعث منه ضوء بأطوال موجية مختلفة ، ولكن كل مادة فلورية لها طول موجة إثارة ينتج أقوى وميض ، لذلك من الضروري إضافة مرشح الإثارة (بشكل عام ، هناك مرشحات إثارة للأشعة فوق البنفسجية والأرجوانية والأزرق والأخضر) ، والتي تسمح فقط لضوء الإثارة بطول موجي معين بالمرور عبر العينة وتشعيعها ، بينما تمتص الضوء الآخر. بعد أن يتم تشعيع كل مادة بضوء الإثارة ، فإنها تصدر وميضًا مرئيًا بطول موجة أطول من الطول الموجي للإشعاع في وقت قصير جدًا. الإسفار محدد وهو أضعف عمومًا من ضوء الإثارة. من أجل مراقبة الفلورة المحددة ، يلزم وجود مرشح حجب (أو قمع) خلف العدسة الشيئية. لها وظيفتان: إحداهما امتصاص وحجب ضوء الإثارة من دخول العدسة ، حتى لا تزعج التألق وتتلف العينين ؛ والآخر هو تحديد الفلورة المحددة والسماح لها بالمرور ، مع إظهار لون الفلورسنت المحدد. يجب استخدام المرشحتين معًا.
هناك نوعان من المجاهر الفلورية من حيث مساراتها البصرية:
1. مجهر ناقل الحركة الفلوري: مصدر ضوء الإثارة يثير التألق من خلال مادة العينة من خلال عدسة المكثف. يشيع استخدام جامع المجال المظلم ، ويمكن أيضًا استخدام جامع عادي لضبط المرآة بحيث ينتقل ضوء الإثارة وتجاوزه إلى العينة. هذا مجهر مضان قديم الطراز. الميزة هي أن التألق قوي عند التكبير المنخفض ، والعيب هو أن التألق يتناقص مع زيادة التكبير. لذلك ، من الأفضل مراقبة مواد العينات الأكبر.
2. مجهر Epi-fluorescence هذا نوع جديد من مجهر مضان تم تطويره في العصر الحديث. الفرق هو أن ضوء الإثارة يسقط من العدسة الشيئية إلى سطح العينة ، أي أن نفس العدسة الموضوعية تستخدم كمكثف الإضاءة والعدسة الموضوعية لتجميع الفلورة. يجب إضافة فاصل شعاع مزدوج اللون في مسار الضوء ، والذي يبعد 45 درجة عن اليورانيوم الخفيف. ينعكس ضوء الإثارة على العدسة الموضوعية ويتم جمعه على العينة. الفلورة الناتجة عن العينة وضوء الإثارة المنعكس على سطح العدسة للعدسة الموضوعية وسطح الغطاء الزجاجي يدخلان العدسة الشيئية في نفس الوقت ، ويعودان إلى شعاع الشعاع ذي اللونين لجعل ضوء الإثارة منفصلاً عن التألق ، يتم امتصاص ضوء الإثارة المتبقي عن طريق حجب المرشحات. إذا قمت بالتغيير إلى مجموعة من مرشحات الإثارة المختلفة / فواصل شعاع ثنائية اللون / مرشحات حجب ، فيمكن تلبية احتياجات منتجات تفاعل الفلورسنت المختلفة. ميزة هذا النوع من المجهر الفلوري هي أن إضاءة مجال الرؤية موحدة ، والتصوير واضح ، وكلما زاد التكبير ، كان التألق أقوى.
(2) كيفية استخدام مجهر التألق.
1. قم بتشغيل مصدر الضوء ، يحتاج مصباح الزئبق عالي الضغط إلى التسخين لبضع دقائق للوصول إلى النقطة الأكثر سطوعًا.
2. بالنسبة لمجهر النقل الفلوري ، يجب تثبيت مرشح الإثارة المطلوب بين مصدر الضوء والمكثف ، ويجب تثبيت مرشح الحجب المقابل خلف العدسة الشيئية. تحتاج مجاهر Epi-fluorescence إلى إدخال مرشح الإثارة المطلوب / فاصل شعاع ثنائي اللون / مرشح حجب في الفتحات الموجودة في مسار الضوء.
3. لاحظ باستخدام عدسة منخفضة التكبير ، واضبط مركز مصدر الضوء وفقًا لجهاز الضبط لأنواع مختلفة من المجاهر الفلورية بحيث يكون موجودًا في وسط بقعة الإضاءة بأكملها.
4. ضع ورقة العينة ولاحظ بعد التركيز. يجب الانتباه أثناء الاستخدام: لا تراقب المرشح الطرفي مباشرة ، حتى لا تسبب ضررًا للعينين ؛ عند مراقبة العينة بعدسة زيتية ، يجب استخدام عدسة زيت خاصة بدون مضان ؛ بعد إطفاء مصباح الزئبق عالي الضغط ، لا يمكن تشغيله مرة أخرى على الفور ، ويجب اختباره. يمكن إعادة تشغيله بعد 5 دقائق ، وإلا فإنه سيكون غير مستقر ويؤثر على عمر مصباح الزئبق.
(3) الملاحظة باستخدام مرشح الضوء الأزرق البنفسجي تحت مجهر الفلورسنت على منصة التدريس ، يمكن ملاحظة أن الخلايا الملطخة بنسبة 0.01 في المائة من صبغة الفلورسنت البرتقالية أكريدين ، والنواة والسيتوبلازم متحمسون لإنتاج لونين مختلفين من مضان (غامق) أخضر وبرتقالي أحمر).
