قياس حجم كتلة الأنسجة باستخدام المجاهر البيولوجية
حتى الآن، يعد التثبيت بالتبريد والتجميد-والتقطيع الرقيق للغاية والتجفيف بالتجميد-طرقًا روتينية للفحص المجهري للأنسجة والخلايا بالأشعة السينية-. يرجى تقديم التفاصيل التالية بخصوص هذه الطريقة:
يمكن للمجهر البيولوجي المزود بمصباح كشاف أن يحرك الضوء لأعلى ولأسفل لتحقيق سطوع معتدل، ويمكن أيضًا تغيير فتحة الفتحة المتغيرة لتحقيق سطوع معتدل. إذا كان الضوء من الشمس، فيمكن رفع الضوء بشكل مناسب ويمكن توسيع فتحة الضوء المتغير بشكل مناسب. إذا كان الضوء قويًا جدًا، فيمكن خفض ضوء الكشاف بشكل مناسب، كما يمكن تقليل فتحة التقاطع بشكل مناسب. إذا كنت لا تزال تشعر بالإبهار في هذه الحالة، يمكنك اختيار وضع الفلتر المناسب على الحامل الموجود أسفل دائرة الضوء. يمكن لهذا البلوط أن يحقق سطوعًا يرضيك. بالطبع، يمكن لضبط المواضع العلوية والسفلية لضوء الكشاف تغيير حجم فتحة قراءة الضوء واختيار المرشحات المناسبة، الأمر الذي يتطلب فترة معينة من الممارسة والخبرة.
من الأمور المهمة جدًا في الفحص المجهري البيولوجي هي عملية أخذ العينات وعزل الخلايا. بعد التجفيف بالتجميد- والتضمين بالراتنج (FD)، يجب معالجة المقاطع الرقيقة المجمدة - بعناية لضمان عدم تلف محتوى العنصر المكون من 65 عنصرًا لكل جزء أثناء المراقبة والتحليل. نظرًا للخطوات العديدة والتكلفة العالية التي ينطوي عليها التحليل الدقيق للأشعة السينية-، فإنه من المؤسف استخلاص استنتاجات غير صحيحة في حالة تلف الخلايا التي تم تحليلها أو موتها بعد معالجة مطولة ومتعددة-الخطوات. خلايا عضلة القلب المفصولة بالمعالجة بالجيلاتيناز لها شكلان، أحدهما على شكل قضيب طويل والآخر على شكل دائري. يشير الأخير إلى الخلايا الميتة التي تضررت أثناء عملية فصل الخلايا.
يختلف محتوى وتوزيع الشوارد في هذين النوعين من الخلايا اختلافًا كبيرًا تحت المجهر البيولوجي. Na مرتفع جدًا وK منخفض للغاية في الخلايا العضلية القلبية الدائرية، وتركيز Ca في التشعبات الخطية مرتفع جدًا. بعد التحقق باستخدام طرق تحليلية أخرى، ثبت أن ارتفاع Na وK المنخفض في الخلايا الدائرية وارتفاع Ca في الميتوكوندريا هما نتيجة تلف الغشاء أثناء انفصال الخلايا. غالبًا ما تتضمن طريقة التثبيت البارد للخلايا والأنسجة تبريدها أولاً ثم تخزينها في النيتروجين السائل. تثبيت التبريد أمر بالغ الأهمية لتأثير الحفظ. الخلايا الحية أو الأنسجة الطازجة غنية بالماء، وعندما تروى، فإن أجزاء الخلايا أو الأنسجة التي تتلامس بشكل مباشر مع مادة التبريد (خاصة عند استخدام النيتروجين السائل للتبريد) غالبًا ما يتم تجميدها وتثبيتها أولاً، وتشكل "قشرة" تمنع الجزء المركزي من الخلايا من السحق والتثبيت. لذلك، عند إجراء التحليل الدقيق للأشعة السينية، غالبًا ما يتبين وجود بلورات ثلجية في الجزء المركزي من الخلايا الأكبر حجمًا. ولمنع حدوث هذا الموقف، يتم استخدام مادة ذات نقطة انصهار أعلى من النيتروجين السائل ولكن أقل بمقدار 806 درجة مئوية كمبرد. هناك العديد من هذه المواد، ولكن من السهل الحصول عليها وأكثرها بأسعار معقولة هو البروبان المركز (نقطة الغليان 42.120ج، نقطة الانصهار 187.10ج، الوزن الجزيئي 44.1)، والذي يتميز أيضًا بمعدل تبريد سريع. لكن عيبه أنه قابل للاشتعال.
