قياس الكمية الميكروبية - طريقة العد المباشر المجهري!
يتميز نمو التجمعات البكتيرية بزيادة في عدد الخلايا أو زيادة في المواد الخلوية. هناك عدة طرق لقياس أعداد الخلايا، بما في ذلك العد المجهري المباشر، وعدد اللوحات، والقياس التوربيني بواسطة مقياس الطيف الضوئي، والرقم الأكثر احتمالاً MPN، والترشيح الغشائي. تشمل طرق قياس المواد الخلوية قياس الوزن الجاف للخلية، وقياس محتوى بعض مكونات الخلايا مثل النيتروجين والحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي (DNA)، وقياس المنتجات الأيضية. باختصار، هناك العديد من الطرق لقياس النمو الميكروبي، ولكل منها مزاياها وعيوبها، ويجب أن يتم الاختيار على أساس متطلبات محددة في العمل. تقدم هذه التجربة بشكل أساسي طريقة العد المباشر للمجهر شائعة الاستخدام في الإنتاج وأعمال البحث العلمي.
متطلبات الغرض
1. توضيح مبدأ استخدام لوحة عد خلايا الدم في العد.
2. إتقان طريقة استخدام لوحة عد خلايا الدم للعد الميكروبي.
2، المبادئ الأساسية
طريقة العد المجهري المباشر هي طريقة بسيطة وسريعة وبديهية للعد المباشر لكمية صغيرة من تعليق العينة تحت المجهر عن طريق وضعها على شريحة زجاجية خاصة بمساحة وحجم معينين (المعروف أيضًا باسم عداد البكتيريا). في الوقت الحاضر، تشتمل أجهزة عد البكتيريا شائعة الاستخدام في الداخل والخارج على لوحات عد خلايا الدم، وأجهزة عد البكتيريا بيتروف هاوزر، وأجهزة عد البكتيريا هاوكسلي، والتي يمكن استخدامها جميعًا لحساب معلقات الخميرة والبكتيريا والجراثيم الفطرية، وما إلى ذلك. بنفس المبدأ الأساسي. النوعان الأخيران من العدادات البكتيرية يبلغ حجمهما الإجمالي {{0}}.02 مم 3 بعد تغطيتهما بغطاء زجاجي، وتكون المسافة بين زجاج الغطاء والشريحة الحاملة 0.02 مم فقط. ولذلك، يمكن استخدام هدف الغمر بالزيت لمراقبة وحساب الخلايا الأصغر مثل البكتيريا. بالإضافة إلى استخدام هذه العدادات البكتيرية، هناك أيضًا طريقة تقدير للمراقبة المباشرة لنسبة مساحة اللطاخة إلى مساحة الحقل تحت المجهر، والتي تستخدم بشكل عام للفحص البكتريولوجي للحليب. مزايا العد المباشر بالمجهر بديهية وسريعة وسهلة التشغيل. لكن عيب هذه الطريقة هو أن النتائج المقاسة عادة ما تكون مجموع الخلايا الميتة والحية. في الوقت الحاضر، هناك بعض الأساليب التي يمكنها التغلب على هذا العيب، مثل الجمع بين ثقافة غرفة تلطيخ الخلايا الحية (وقت قصير) وإضافة مثبطات انقسام الخلايا لتحقيق هدف عد الخلايا الحية فقط.
استخدام لوحة عد خلايا الدم كمثال للعد المباشر تحت المجهر. يمكن العثور على طرق استخدام العدادين البكتيريين الآخرين في أدلة الشركات المصنعة المختلفة. يعد العد المباشر تحت المجهر باستخدام لوحة عد خلايا الدم طريقة شائعة الاستخدام للعد الميكروبي. لوحة العد عبارة عن شريحة زجاجية مصنوعة خصيصًا بها أربعة أخاديد تشكل ثلاث منصات عليها؛ تنقسم المنصة الأوسع في المنتصف إلى نصفين بواسطة أخدود أفقي قصير، وتوجد شبكة على كل جانب من جوانب المنصة. وتنقسم كل شبكة إلى تسع شبكات كبيرة، والشبكة الكبيرة في المنتصف هي غرفة العد. يظهر هيكل لوحة عد خلايا الدم في الشكل l{{0}}. حجم غرفة العد عموما له نوعان من المواصفات. الأول هو أن المربع الكبير مقسم إلى 25 مربعًا متوسطًا، وكل مربع مقسم أيضًا إلى 16 مربعًا صغيرًا (الشكل 15-2)؛ هناك طريقة أخرى وهي تقسيم مربع كبير إلى 16 مربعًا متوسطًا، ثم يتم تقسيم كل مربع إلى 25 مربعًا صغيرًا. ومع ذلك، بغض النظر عن حجم لوحة العد، يوجد 400 مربعات صغيرة في كل مربع كبير. إذا كان طول ضلع كل مربع 1 مم، فإن مساحة كل مربع كبير هي lmm2. بعد التغطية بغطاء زجاجي، يكون الارتفاع بين زجاج الغطاء والشريحة 0.1 مم، وبالتالي يكون حجم غرفة العد 0.1 مم 3 (جزء من الألف من المليلتر). الشكل 15-1 هيكل لوحة عد خلايا الدم (I) الشكل 15-2 هيكل لوحة عد خلايا الدم (II) منظر أمامي؛ ب. عرض القسم الرأسي؛ تحتوي الشبكة الموسعة على مربع كبير في المنتصف كغرفة العد 1. لوحة عد خلايا الدم؛ 2. غطاء الزجاج. عند العد في غرفة العد، عادة ما يتم حساب العدد البكتيري الإجمالي لخمسة مربعات، ثم يتم الحصول على متوسط قيمة كل مربع، مضروباً في 25 أو 16 للحصول على العدد البكتيري الكلي في مربع كبير، والذي يتم بعد ذلك تحويله إلى العدد الكلي للبكتيريا في المحلول البكتيري lml. بافتراض أن إجمالي عدد البكتيريا في خمس شبكات مربعة هو A وعامل التخفيف للمحلول البكتيري هو B. إذا كان هناك 25 لوحة عد في الشبكة المربعة، فإن إجمالي عدد البكتيريا في 1 مل من المحلول البكتيري هو A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. وبالمثل، إذا كان هناك 16 لوحة عد في الشبكة المربعة، فإن إجمالي عدد البكتيريا في 1 مل من المحلول البكتيري هو A/5 × 16 × 104 × B=32000A · ب
