تعزيز مزايا الفحص المجهري متعدد الفوتون بالليزر
يعد المسح المجهري متعدد الفوتون بالليزر تحسنًا كبيرًا في الفحص المجهري الضوئي، ويتجلى بشكل رئيسي في القدرة على مراقبة الهياكل العميقة للخلايا الحية والخلايا الثابتة والأنسجة، والحصول على هياكل مستوية Z واضحة وحادة متعددة الطبقات، وهي الشرائح الضوئية، والتي يمكن يمكن استخدامها لبناء هياكل صلبة ثلاثية الأبعاد للعينات. يستخدم المجهر متحد البؤر مصدر ضوء الليزر، والذي يتم توسيعه لملء المستوى البؤري بأكمله للعدسة الشيئية، ثم يتقارب في نقاط صغيرة جدًا على المستوى البؤري للعينة من خلال نظام العدسة للعدسة الشيئية. وفقًا للفتحة العددية للعدسة الشيئية، يبلغ قطر نقطة الإضاءة الساطعة حوالي 0.25-0.8 ميكرومتر، والعمق حوالي 0.{{7} }.5 ميكرومتر. يتم تحديد حجم نقطة البؤر من خلال تصميم المجهر، وطول موجة الليزر، والخصائص الموضوعية، وإعدادات حالة وحدة المسح، وخصائص العينة. نطاق الإضاءة وعمق المجهر الميداني كبيران، في حين تركز إضاءة المجهر متحد البؤر على نقطة محورية على المستوى البؤري. الميزة الأساسية للفحص المجهري متحد البؤر هي أنه يمكنه إجراء تقطيع بصري جيد على عينات الفلورسنت السميكة (حتى 50 ميكرومتر أو أكثر)، بسمك يتراوح من 0.5 إلى 1.5 ميكرومتر تقريبًا. يمكن الحصول على سلسلة صور الشرائح الضوئية عن طريق تحريك العينة لأعلى ولأسفل باستخدام محرك السائر ذو المحور Z الخاص بالمجهر. يتم التحكم في جمع معلومات الصورة داخل المستوى * *، دون تداخل من الإشارات المنبعثة من مواضع أخرى على العينة. بعد إزالة تأثير مضان الخلفية وزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء، تم تحسين تباين ودقة الصور البؤرية بشكل ملحوظ مقارنة بصور مضان الإضاءة الميدانية التقليدية. في العديد من العينات، تتشابك المكونات الهيكلية المعقدة لتشكل أنظمة معقدة، ولكن بمجرد جمع ما يكفي من المقاطع البصرية، يمكننا استخدام البرامج لإعادة بنائها في ثلاثة أبعاد. تم استخدام هذه الطريقة التجريبية على نطاق واسع في الأبحاث البيولوجية لتوضيح العلاقات الهيكلية والوظيفية المعقدة بين الخلايا أو الأنسجة.
