ميزات وتطبيقات مجهر الليزر متحد البؤر
بينما في المجهر العادي يتم عزل مستوى الصورة للملاحظة عن المستويات المحورية المجاورة عن طريق تداخل المستوى البؤري للعدسة الموضوعية مع الكاشف، في المجهر متحد البؤر يتم تحقيق هذا العزل عن طريق إضاءة العينة بنقطة محدودة الحيود الضوء وتصفية الضوء الشارد باستخدام ثقب في مسار الضوء المجمع عند التركيز المترافق لنقطة الضوء هذه لتحقيق هذا العزل وبالتالي تحسين الدقة.
يمكن فقط للضوء المنعكس من طبقة العينة المترافقة أن يمر عبر الثقب الموجود في مسار ضوء التجميع، بينما يتم حظر بقية انعكاسات طبقة العينة غير ذات الصلة بواسطة الثقب. وهذا يعطي زيادة كبيرة في القرار. يظهر أدناه مقارنة جنبًا إلى جنب بين الفحص المجهري الفلوري متعدد الأبعاد والفحص المجهري متحد البؤر لنفس العينة السميكة. عندما يتم التقاط سلسلة من الصور في مستويات بؤرية مختلفة، يتم إنتاج صورة يشار إليها عادة باسم "z-stack"، والتي توضح مكاسب الدقة والتباين التي يوفرها الفحص المجهري متحد البؤر والأسباب الكامنة وراء هذه المكاسب. يمكن ملاحظة أن فحص الصورة في الجزء العلوي من الرصة حيث يكون مستوى التصوير فوق الأنسجة يكشف عن كمية كبيرة من الضوء المتناثر في الصورة الفلورية، في حين تظهر صورة المجهر متحد البؤر باللون الأسود. يساهم هذا التخفيض في PSF في الاتجاه المحوري بشكل مباشر في الاختلاف في الدقة الملحوظة في الواجهة البصرية في منتصف المكدس z.
التصوير بالمسح الضوئي للشرائح
ميزة أخرى للمسح المجهري متحد البؤر بالليزر هي أنها تقنية تصوير مسح. تضيء تقنيات الإضاءة واسعة المجال التقليدية العينة بأكملها بحيث يمكن التقاط الصورة مباشرة بالعين المجردة أو الكاشف، لكن LSCM يستخدم واحدًا أو أكثر من حزم الضوء المركزة للمسح عبر العينة، بحيث تسمى الصورة الناتجة بـ شريحة بصرية، كما هو مبين في الرسم البياني التالي. يظهر أدناه الفرق بين الإضاءة التقليدية واسعة المجال والإضاءة البؤرية للمسح الضوئي بالليزر.
لذلك، تظهر الطريقة العملية للفحص المجهري متحد البؤر الحديث في الشكل أدناه. يتم تمرير ضوء الإثارة من الليزر من خلال مرآة مزدوجة اللون ويتم مسحه ضوئيًا من خلال زوج من مرايا الجلفانومتر في الاتجاه x والاتجاه y للعينة، ويمر الإثارة (أو الانعكاس) للعينة عبر ثقب صغير في PMT ليتم تسجيل الكاشف، ويتم إعادة بناء الصورة الممسوحة ضوئيًا المسجلة بواسطة جهاز كمبيوتر لإنتاج صورة فعلية للعينة.
