المعرفة المتعلقة بالمجهر مضان متحد البؤر
المبدأ الأساسي للمجهر الفلوري متحد البؤر هو استخدام مصدر ضوء نقطي لتشعيع العينة، وتشكيل بقعة صغيرة محددة جيدًا على المستوى البؤري. يتم جمع التألق المنبعث من البقعة بعد التشعيع بواسطة العدسة الموضوعية وإرساله مرة أخرى إلى مقياس الطيف الضوئي المكون من مرآة ملونة ثنائية الاتجاه على طول مسار التشعيع الأصلي. يرسل مقياس الطيف الضوئي مضانًا مباشرة إلى الكاشف. يوجد ثقبان أمام مصدر الضوء والكاشف، ويطلق عليهما على التوالي فتحات الإضاءة وفتحات الكشف. الأبعاد الهندسية للاثنين متسقة، حوالي 100-200 نانومتر؛ بالمقارنة مع نقطة الضوء على المستوى البؤري، فإن الاثنين مترافقان، مما يعني أن نقطة الضوء تمر عبر سلسلة من العدسات ويمكنها في النهاية التركيز على كل من ثقب الإضاءة وثقب الكشف في وقت واحد. وبهذه الطريقة، يمكن للضوء الصادر من المستوى البؤري أن يتقارب ضمن نطاق فتحة الكشف، بينما يتم حجب الضوء المتناثر من أعلى أو أسفل المستوى البؤري خارج فتحة الكشف ولا يمكن تصويره. عن طريق مسح العينة نقطة بنقطة باستخدام الليزر، يحصل أنبوب المضاعف الضوئي بعد اكتشاف الثقب أيضًا على الصورة البؤرية المقابلة لنقطة الضوء نقطة بنقطة، والتي يتم تحويلها إلى إشارة رقمية وإرسالها إلى الكمبيوتر. وأخيرا، يتم تجميع صورة متحد البؤر واضحة للمستوى البؤري بأكمله على الشاشة.
كل صورة مستوى بؤري هي في الواقع مقطع عرضي بصري للعينة، والتي لها دائمًا سمك معين، يُعرف أيضًا باسم المقطع البصري الرقيق. نظرًا لأن شدة الضوء عند النقطة البؤرية أكبر بكثير من تلك الموجودة عند النقطة غير البؤرية، ويتم ترشيح ضوء المستوى غير البؤري بواسطة ثقوب، فإن عمق مجال النظام متحد البؤر يكون تقريبًا صفر. يمكن للمسح على طول اتجاه المحور Z تحقيق التصوير المقطعي البصري، وتشكيل شريحة بصرية ثنائية الأبعاد في النقطة البؤرية للعينة المرصودة. ومن خلال الجمع بين مسح مستوى XY (المستوى البؤري) ومسح المحور Z (المحور البصري)، يمكن الحصول على صورة ثلاثية الأبعاد للعينة من خلال تجميع طبقات مستمرة من الصور ثنائية الأبعاد ومعالجتها باستخدام برامج كمبيوتر متخصصة.
يتم دائمًا تركيز ثقب الكشف وثقب مصدر الضوء على نفس النقطة، بحيث لا يمكن للفلورة المثارة خارج مستوى التركيز أن تدخل ثقب الكشف.
التعبير البسيط عن مبدأ عمل الفحص المجهري متحد البؤر بالليزر هو أنه يستخدم الليزر كمصدر للضوء، ويضيف جهاز مسح ليزر وجهاز تركيز مترافق على أساس التصوير المجهري الفلوري التقليدي. إنه نظام يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر للحصول على الصور الرقمية ومعالجتها.
