المعرفة حول -الفحص المجهري لفلورة الفوتون
المبدأ الأساسي لإثارة الفوتون- هو أنه عند كثافة الفوتون العالية، يمكن لجزيئات الفلورسنت أن تمتص في نفس الوقت فوتونين طويلي الطول الموجي وتصدر فوتونًا ذو طول موجي أقصر بعد فترة قصيرة مما يسمى -بعمر الحالة المثارة؛ التأثير هو نفسه استخدام فوتون له نصف الطول الموجي للطول الموجي الطويل لإثارة جزيئات الفلورسنت. يتطلب إثارة فوتونين كثافة فوتون عالية، ومن أجل تجنب إتلاف الخلايا، يستخدم -مجهر فوتوني عالي-وضع الطاقة-ليزر نبضي مقفل. يتمتع الليزر المنبعث من هذا الليزر بطاقة ذروة عالية ومتوسط طاقة منخفض، مع عرض نبضة يبلغ 100 فمتوثانية فقط وتردد يصل إلى 80 إلى 100 ميجا هرتز. عند استخدام عدسة موضوعية ذات فتحة رقمية عالية لتركيز فوتونات الليزر النبضي، تكون كثافة الفوتون عند النقطة البؤرية للعدسة الهدف هي الأعلى، ولا يحدث إثارة الفوتونين إلا عند النقطة البؤرية للعدسة الهدف. لذلك، لا يتطلب مجهر الفوتون الثنائي- ثقبًا متحد البؤر، مما يؤدي إلى تحسين كفاءة اكتشاف التألق.
في ظواهر التألق العامة، نظرًا لانخفاض كثافة الفوتون في ضوء الإثارة، يمكن لجزيء الفلورسنت أن يمتص فوتونًا واحدًا فقط في المرة الواحدة ثم ينبعث فوتونًا فلوريًا آخر من خلال الانتقال الإشعاعي، وهو ما يُعرف باسم مضان الفوتون الفردي. بالنسبة لعمليات إثارة التألق باستخدام الليزر كمصادر للضوء، قد تحدث ظواهر فلورية -فوتونين أو حتى ظواهر فلورية متعددة الفوتون. في هذه الحالة، يكون لمصدر ضوء الإثارة المستخدم كثافة عالية وكثافة فوتونية تلبي متطلبات جزيئات الفلورسنت لامتصاص فوتونين في وقت واحد. في عملية استخدام الليزر العام كمصدر للضوء المثير، لا تزال كثافة الفوتون غير كافية لإنتاج -ظاهرة امتصاص فوتون. عادة، يتم استخدام ليزر نبض الفيمتو ثانية، مع وصول الطاقة اللحظية إلى مستوى الميغاواط. لذلك، فإن الطول الموجي لاثنين من فوتونات الفلورة - أقصر من طول موجة ضوء الإثارة، وهو ما يعادل التأثير الناتج عن إثارة نصف طول موجة الإثارة.
