مقدمة لمزايا محسنة لفحص الليزر Multiphoton Microscopy
يعتبر مجهر Multiphoton للمسح الضوئي بالليزر تحسنًا كبيرًا في المجهر البصري ، ويتجلى بشكل رئيسي في القدرة على مراقبة الهياكل العميقة للخلايا الحية والخلايا الثابتة والأنسجة ، والحصول على هياكل Z واضحة ومتعددة الطبقات ، وهي شرائح بصرية ، والتي يمكن استخدامها لبناء الهياكل الصلبة ثلاثية الأبعاد. يستخدم المجهر المركزة مصدر ضوء الليزر ، والذي يتم توسيعه لملء المستوى البؤري بالكامل للعدسة الموضوعية ، ثم تتلاقى إلى نقاط صغيرة جدًا على المستوى البؤري للعينة من خلال نظام العدسة للعدسة الهدف. وفقًا للفتحة العددية للعدسة الموضوعية ، فإن قطر نقطة الإضاءة المشرقة حوالي 0. 25-0. 8 μ m ، والعمق يدور حول 0. يتم تحديد حجم النقطة المركزة من خلال تصميم المجهر ، وطول موجة الليزر ، والخصائص الموضوعية ، وإعدادات حالة وحدة المسح ، وخصائص العينة. يعد نطاق الإضاءة وعمق المجهر الميداني كبيرًا ، في حين أن الإضاءة المجهر متحد البؤر يركز على نقطة محورية على المستوى البؤري. تتمثل الميزة الأساسية في المجهر متحد البؤر في أنه يمكن أن يؤدي تقسيمًا بصريًا جيدًا على عينات الفلورسنت السميكة (حتى 5 {10}} μ m أو أكثر) ، بسمك ما يقرب من 0.5 إلى 1.5 μ م. يمكن الحصول على سلسلة من صور الشريحة البصرية عن طريق تحريك العينة لأعلى ولأسفل باستخدام محرك السائر المحور z من المجهر. يتم التحكم في مجموعة معلومات الصورة داخل الطائرة * * ، دون تدخل من الإشارات المنبعثة من مواقع أخرى على العينة. بعد إزالة تأثير مضان الخلفية وزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء ، تم تحسين التباين ودقة الصور متحد البؤر بشكل كبير مقارنة مع صور مضان الإضاءة في المجال التقليدية. في العديد من العينات ، تتداخل المكونات الهيكلية المعقدة لتشكيل أنظمة معقدة ، ولكن بمجرد أن يتم جمع أقسام بصرية كافية ، يمكننا استخدام البرامج لإعادة بنائها في ثلاثة أبعاد. تم استخدام هذه الطريقة التجريبية على نطاق واسع في البحوث البيولوجية لتوضيح العلاقات الهيكلية والوظيفية المعقدة بين الخلايا أو الأنسجة.
