تحسين مزايا المجهر متعدد الفوتون المسح بالليزر
يعد المجهر متعدد الفوتون للمسح بالليزر تحسينًا مهمًا للمجهر الضوئي، والذي يُظهر بشكل أساسي أنه يمكنه مراقبة البنية العميقة للخلايا الحية والخلايا والأنسجة الثابتة، ويمكنه الحصول على بنية مستوية Z واضحة وحادة متعددة الطبقات، أي شرائح بصرية ، والتي يمكن استخدامها لبناء الهيكل الصلب ثلاثي الأبعاد للعينات. يستخدم المجهر متحد البؤر مصدر ضوء الليزر، الذي يملأ المستوى البؤري الخلفي بالكامل للعدسة الموضوعية بعد التوسيع، ثم يمر عبر نظام العدسة للعدسة الموضوعية ليتقارب في نقاط صغيرة جدًا على المستوى البؤري للعينة. وفقًا للفتحة العددية للعدسة الشيئية، يبلغ قطر نقطة الإضاءة الأكثر سطوعًا حوالي 0.25 ~ 0.8μm والعمق حوالي 0.5 ~ 1.5 μm .. يعتمد حجم تركيز البلمرة المشتركة على تصميم المجهر، والطول الموجي لليزر، وخصائص العدسة الموضوعية، وإعداد حالة وحدة المسح وخصائص العينة. نطاق الإضاءة وعمق المجهر الميداني كبير جدًا، بينما تتركز إضاءة المجهر البؤري على * * التركيز على المستوى البؤري. الميزة الأساسية للمجهر متحد البؤر هي أنه يمكن أن يصنع شرائح بصرية دقيقة من عينات الفلورسنت السميكة (والتي يمكن أن تصل إلى 50 ميكرومتر أو أكثر)، ويبلغ سمك الشرائح حوالي 0.5 إلى 1.5 ميكرومتر. يمكن الحصول على سلسلة من صور الشرائح الضوئية عن طريق تحريك العينة لأعلى ولأسفل بواسطة محرك متدرج للمحور Z للمجهر. يتم التحكم في الحصول على معلومات الصورة في المستوى الأول ولن يتم إزعاجها بواسطة إشارات من مواقع أخرى على العينة. بعد إزالة تأثير مضان الخلفية وزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء، من الواضح أن التباين ودقة الصورة متحد البؤر تحسنت مقارنة مع صورة مضان الإضاءة الميدانية التقليدية. في العديد من العينات، تتشابك العديد من المكونات الهيكلية المعقدة لتشكل نظامًا معقدًا، ولكن بمجرد جمع ما يكفي من المقاطع البصرية، يمكننا إعادة بنائها في ثلاثة أبعاد بواسطة البرنامج. تم استخدام هذه الطريقة التجريبية على نطاق واسع في الأبحاث البيولوجية لتوضيح العلاقة الهيكلية والوظيفية المعقدة بين الخلايا أو الأنسجة.
