مزايا محسنة للميكروسكوب متعدد الفوتونات المسح بالليزر
يعد الفحص المجهري متعدد الفوتونات الماسح بالليزر تحسينًا كبيرًا في الفحص المجهري البصري ، بشكل أساسي لمراقبة البنية العميقة للخلايا الحية والخلايا والأنسجة الثابتة ، ويمكن الحصول على هياكل مستوية Z متعددة الطبقات واضحة وحادة ، أي شرائح بصرية ، ويمكن بناء الهيكل الصلب ثلاثي الأبعاد للعينة. يستخدم المجهر متحد البؤر مصدر ضوء الليزر ، والذي يتم توسيعه لملء المستوى البؤري الخلفي بالكامل للعدسة الموضوعية ، ثم يتقارب في نقطة صغيرة جدًا على المستوى البؤري للعينة من خلال نظام العدسة للعدسة الموضوعية. اعتمادًا على الفتحة العددية للعدسة الشيئية ، يبلغ قطر نقطة الإضاءة الأكثر سطوعًا حوالي 0. 25 ~ 0 .8 ميكرومتر ، والعمق حوالي 0. 5 ~ 1.5 ميكرومتر. يعتمد حجم البقعة البؤرية على تصميم المجهر وطول موجة الليزر وخصائص العدسة الموضوعية وإعداد حالة وحدة المسح وطبيعة العينة. تحتوي المجاهر الميدانية على مجموعة كبيرة من الإضاءة وعمق إضاءة كبير ، بينما تحتوي المجاهر البؤرية على إضاءة مركزة في نقطة محورية على المستوى البؤري. تتمثل الميزة الأساسية للفحص المجهري متحد البؤر في أنه يمكن إجراء تقسيم بصري دقيق لعينات الفلورسنت السميكة (حتى 5 0 ميكرومتر أو أكثر) ، بسماكة حوالي 0.5 إلى 1.5 ميكرومتر. يمكن الحصول على سلسلة من صور المقطع البصري عن طريق تحريك العينة لأعلى ولأسفل باستخدام محرك السائر ذو المحور Z المجهر. يتم التحكم في الحصول على معلومات الصورة داخل المستوى ولن تتداخل مع إشارات من مواقع أخرى في العينة. بعد إزالة تأثير مضان الخلفية وزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء ، تم تحسين التباين ودقة الصور البؤرية بشكل ملحوظ مقارنة بالصور الفلورية التقليدية لإضاءة المجال. في العديد من العينات ، تتشابك العديد من المكونات الهيكلية المعقدة لتشكيل أنظمة معقدة ، ولكن بمجرد جمع عدد كافٍ من الأقسام البصرية ، يمكننا إعادة بنائها في شكل ثلاثي الأبعاد من خلال البرنامج. تم استخدام هذا النهج التجريبي على نطاق واسع في الأبحاث البيولوجية لتوضيح العلاقات الهيكلية والوظيفية المعقدة بين الخلايا أو الأنسجة.
