كيفية اختيار المجهر الفلوري المناسب
المجهر الفلوري هو أحد معدات التصوير المجهري القياسية في المختبرات وأقسام علم الأمراض، والذي يستخدم خصائص الفلورة للمراقبة والتصوير. يتم استخدامه على نطاق واسع في مجالات مختلفة مثل بيولوجيا الخلية، وعلم الأحياء العصبي، وعلم النبات، وعلم الأحياء الدقيقة، وعلم الأمراض، وعلم الوراثة، وما إلى ذلك. يتميز التصوير الفلوري بحساسية عالية وخصوصية، مما يجعله مناسبًا جدًا لمراقبة توزيع بروتينات وعضيات معينة، وما إلى ذلك. في الأنسجة والخلايا، ودراسة التوطين المشترك والتفاعلات، وتتبع العمليات الديناميكية الحياتية مثل تغيرات تركيز الأيونات، وما إلى ذلك.
اختيار المجاهر
تنقسم المجاهر الفلورية بشكل أساسي إلى ثلاث فئات: المجاهر الفلورية المستقيمة (مناسبة للتقطيع)، والمجاهر الفلورية المقلوبة (مناسبة للخلايا الحية وأيضًا للتقطيع)، والمجاهر الفلورية المجسمة (مناسبة للعينات الأكبر حجمًا، مثل النباتات وأسماك الزرد (الكبار/ الجنينية)، الميداكا، أعضاء الفأر/الجرذ، وما إلى ذلك).
اختيار كتل مرشح الفلورسنت
لا ينبغي أن يأخذ اختيار كتل المرشح في الاعتبار فقط الأطوال الموجية للإثارة والانبعاث لتحقيقات الفلورسنت، بل يجب أيضًا مراعاة ما إذا كان هناك إثارة غير محددة وما إذا كان هناك تداخل لوني للعينات ذات العلامات متعددة الألوان. في التجربة، سوف نختار الطول الموجي الأقرب إلى ذروة الإثارة قدر الإمكان، ويجب أن يشمل نطاق الاستقبال ذروة الانبعاث. ذروة الإثارة لـ Alexa Fluor 488 هي 500 نانومتر، ويمكن اختيار مرشح الإثارة 480/40 في المجهر الفلوري. يمكن تقسيم كتل مرشح الفلورسنت شائعة الاستخدام في الفحص المجهري الفلوري إلى نوعين: التمريرة الطويلة (LP) وتمريرة النطاق (BP)، والتي تحتاج أيضًا إلى تحديدها وفقًا للاحتياجات.
مجهر متحد البؤر
في الملاحظات المجهرية الفلورية التقليدية، نظرًا لتداخل المواد التي تحمل علامة الفلورسنت وهياكل الفلورسنت التلقائية، فهي مرتبطة بإحكام معًا. ومع ذلك، فإن أهداف الفحص المجهري الفلوري التقليدي لا تجمع الضوء من المستوى البؤري فحسب، بل أيضًا تشتت الضوء لأعلى ولأسفل المستوى البؤري، مما يؤدي إلى انخفاض كبير في دقة الصورة والتباين.
التصوير متحد البؤر يكتشف فقط الضوء المنعكس من مستوى التركيز الذاتي، وبالتالي حل المشكلة المذكورة أعلاه. يشكل مصدر الضوء بقعة صغيرة ودقيقة على المستوى البؤري من خلال ثقب صغير، ويتم جمع الضوء المنبعث من المستوى البؤري من خلال العدسة الموضوعية. غالبية التألق المنبعث من نقاط أعلى أو أسفل المستوى البؤري للعدسة الموضوعية لا يمكن أن يتقارب مع الثقب. فقط التألق الموجود في المستوى البؤري وجزء صغير من التألق غير البؤري يمكن أن يمر عبر الثقب، بينما يتقارب شعاع الضوء خارج المستوى البؤري أمام أو خلف لوحة الثقب ويتم منعه من دخول الكاشف عبر الثقب. الصورة المكتشفة هي من المستوى البؤري، وبالتالي يتم تحسين جودة الصورة النهائية بشكل كبير.
نظرًا للمزايا المتنوعة والتطبيق العملي للمسح المجهري متحد البؤر بالليزر، فهو حاليًا مساعد تجريبي لا غنى عنه في مجالات بيولوجيا الخلية وعلم النبات وأبحاث الخلايا عالية الدقة. وفي الوقت نفسه، في مراكز البحث العلمي المستقبلية، ستكون أداة البحث الأساسية والأساسية.
