كيف يمكنك اختيار المجهر المتحد البؤري المناسب لك؟ هل هناك طريقة محددة؟
يتميز الفحص المجهري متحد البؤر بمزايا أكثر من الفحص المجهري واسع النطاق. يمكن للفحص المجهري متحد البؤر إجراء تقسيم بصري مستمر للعينات واستبعاد تداخل الإشارة من الطائرات غير البؤرية. لهذا السبب ، فإن تطبيق الفحص المجهري متحد البؤر هو بالفعل أكثر شيوعًا. ومع ذلك ، هناك المزيد والمزيد من المجاهر (كنفوكل) في السوق. كيفة تختار؟
يتميز الفحص المجهري متحد البؤر بمزايا أكثر من الفحص المجهري واسع النطاق. يمكن للفحص المجهري متحد البؤر إنشاء أقسام بصرية مستمرة من العينات واستبعاد تداخل الإشارات من الطائرات غير البؤرية. لهذا السبب ، فإن الفحص المجهري متحد البؤر هو في الواقع أكثر شيوعًا. ومع ذلك ، هناك المزيد والمزيد من المجاهر (كنفوكل) في السوق. كيفة تختار؟ عند اختيار مجهر متحد البؤر ، هناك اعتباران أساسيان وهامان: نوع العينة التي تريد دراستها (على سبيل المثال ، الخلايا الثابتة أو الحية) ، ونوع الفحص الذي تريد إجراؤه (على سبيل المثال ، العمليات الخلوية الثابتة أو الديناميكية).
متحد البؤر التصوير للخلايا الثابتة
لتصوير الخلايا أو الأنسجة الثابتة والملطخة ، نختار عمومًا المسح الضوئي بالليزر (LSCM). هذا بشكل أساسي لأن الخلايا الميتة الثابتة تفتقر إلى الأحداث البيولوجية السريعة في الخلايا الحية ويمكن أن تستفيد بشكل أفضل من الدقة المكانية الأعلى لـ LSCM. تصوير LSCM هو تقطيع العينة ضوئيًا بالليزر ، وسرعة المسح (اعتمادًا على سرعة مرآة صفيف المسح) بشكل عام 1 إطارًا في الثانية. تعني أوقات التعرض الأطول خطرًا أكبر للتبييض الضوئي ، ولكن بالنسبة للخلايا الميتة الثابتة ، فإن الوقت ليس حرجًا ويمكننا متوسطه عن طريق التقاط صور متعددة.
التصوير المتحد البؤر للخلايا الحية
يتطلب تصوير الخلايا الحية حماية إضافية من البيئات غير الودية. عند التصوير ، فإن الاعتبار الأول لدينا هو الحفاظ على بقاء الخلية وصحتها. تعتبر عناصر التسخين ذات درجة الحرارة الثابتة وأنظمة التروية ضرورية ، خاصةً لدراسات الفاصل الزمني. الأحداث الكيميائية الحيوية السريعة التي تتحكم في الحالة الفسيولوجية للخلايا الحية هي ما يرغب معظم الناس في دراسته ، لكن هذه الأحداث سريعة جدًا بالنسبة لـ LSCM التقليدية. بالإضافة إلى ذلك ، تسبب التعرض المطول لـ LSCM أيضًا في تلف الضوء السام للخلايا. لذلك ، يتطلب تصوير الخلايا الحية مجاهر متحد البؤر.
هناك خياران بشكل عام للتصوير المتحد البؤر للخلايا الحية: المسح السريع بالليزر والمسح الضوئي للأحجار البركانية وتقطير الأقراص المضغوطة. المسح المجهري متحد البؤر السريع يستبدل مرايا الجلفانومتر الأبطأ بمرايا مسح رنينية أسرع ، مما يتيح سرعات مسح تصل إلى 30 إطارًا في الثانية ؛ بينما تتمتع أقراص القرص الدوار (SDCMs) بميزة المسح الأسرع (على الرغم من أنه لا مفر من فقدان الدقة المكانية) ، يمكن أن تصل سرعتها نظريًا إلى 2000 إطارًا في الثانية (من الناحية العملية ، غالبًا ما تكون محدودة بعوامل أخرى).
إذا كنت قلقًا بشأن التبييض الضوئي أو إشارة التألق الضعيفة جدًا ، فقد يكون SDCM أكثر ملاءمة. تستخدم SDCM قرصين دوارين مع ميكروويلس مصفوفة لتفريق ضوء الإثارة. على عكس LSCM ، الذي يمسح بقعة العينة ، يكتسب SDCM نقاطًا متعددة في وقت واحد (حوالي 100 نقطة بكسل) ، وبالتالي تزداد السرعة بشكل كبير ، وتبييض ضوئي لـ SDCM وأقل سمية ضوئية. ومع ذلك ، يمكنك أيضًا استخدام مكابح المسح السريع لزيادة سرعة المسح ، جنبًا إلى جنب مع أجهزة الكشف عالية الحساسية ، وتقليل طاقة الضوء المثير لتقليل السمية الضوئية ، والتي يمكن أن تحافظ على الوظائف الغنية للمضاربات التقليدية.
نظام التصوير الآلي (كنفوكل)
يحب بعض الباحثين إيجاد طرق لتعديل المجهر ليناسب احتياجاتهم الفردية. ولا يهتم بعض الباحثين حتى بكيفية عمل المجاهر في الواقع. بالنسبة لهذا الأخير ، قد يكون المجهر الآلي متحد البؤر أكثر حسب رغبته. على سبيل المثال ، يعد Olympus FluoViewFV10i عبارة عن مجهر متحد البؤر بالليزر على سطح المكتب 4- آليًا بالكامل. هيكلها المدمج المدمج لا يتطلب أي مساحة تركيب تقريبًا. يعد هذا النوع من الأدوات مثاليًا للباحثين الذين يحتاجون إلى القيام بالكثير من عمليات الحصول على بيانات الصور كل يوم ، لكنهم بالطبع لا يعكسون بشكل كامل وظائف ومرونة الأحجار التقليدية. بالإضافة إلى ذلك ، يعد NikonA1 أيضًا نظامًا متحد البؤر تلقائي بالكامل. مثل معظم مجاهر المسح البؤري التقليدية ، يستخدم NikonA1 رأس مسح الجلفانومتر ، والذي يتميز بدقة أعلى من A1R مع رأس مسح هجين ، ولكن بسرعة أبطأ قليلاً (A1R ~ 30 إطارًا في الثانية)
