تطبيق مبدأ المجهر الفلوري واستخدامه
(1) المبدأ والخصائص الهيكلية للمجهر الفلوري: يستخدم المجهر الفلوري مصدر ضوء نقطي ذو كفاءة إضاءة عالية لإصدار ضوء بطول موجي معين (مثل الضوء فوق البنفسجي 3650 بوصة أو الضوء الأزرق الأرجواني 4200 بوصة) من خلال نظام الترشيح كضوء الإثارة لإثارة العينة. بعد أن تبعث مادة الفلورسنت بالداخل مضانًا بألوان مختلفة، يتم ملاحظته من خلال تكبير العدسة الشيئية والعدسة العينية. بهذه الطريقة، في ظل خلفية تباين قوية، حتى لو كان التألق ضعيفًا جدًا، فمن السهل التعرف عليه وله حساسية عالية. وهي تستخدم أساسا للبحث في بنية الخلية ووظيفتها والتركيب الكيميائي. يتكون الهيكل الأساسي للمجهر الفلوري من مجهر ضوئي عادي بالإضافة إلى بعض الملحقات (مثل مصدر ضوء الفلوريسنت، ومرشح الإثارة، ومقسم الشعاع ثنائي اللون، ومرشح الحجب، وما إلى ذلك). مصدر ضوء الفلورسنت - يستخدم بشكل عام مصباح الزئبق عالي الضغط (50-200W)، والذي يمكن أن ينبعث منه ضوء بأطوال موجية مختلفة، ولكن كل مادة فلورسنت لها طول موجي مثير ينتج أقوى الفلورة، لذلك مرشح الإثارة ( بشكل عام، هناك مرشحات إثارة للأشعة فوق البنفسجية والأرجوانية والأزرق والأخضر)، والتي تسمح فقط للضوء المثير بطول موجي معين بالمرور عبر العينة وتشعيعها، بينما تمتص الضوء الآخر. بعد تشعيع كل مادة بواسطة ضوء الإثارة، فإنها تنبعث منها مضان مرئي بطول موجي أطول من الطول الموجي للإشعاع في وقت قصير جدًا. الإسفار محدد وأضعف بشكل عام من ضوء الإثارة. من أجل مراقبة مضان معين، مطلوب مرشح حجب (أو قمع) خلف العدسة الموضوعية. لها وظيفتان: الأولى هي امتصاص ومنع ضوء الإثارة من الدخول إلى العدسة، حتى لا يزعج الفلورسنت ويتلف العينين؛ والآخر هو تحديد والسماح لمضان معين بالمرور، مما يظهر لون فلورسنت محدد. ويجب استخدام المرشحين معًا.
هناك نوعان من المجاهر الفلورة من حيث مساراتها الضوئية:
1. مجهر مضان ناقل الحركة: يتم تمرير مصدر ضوء الإثارة عبر مادة العينة من خلال عدسة مكثف لإثارة الفلورة. يتم استخدام مجمع الحقل المظلم بشكل شائع، ويمكن أيضًا استخدام المجمع العادي لضبط المرآة بحيث يتم إعادة توجيه ضوء الإثارة وتجاوزه إلى العينة. هذا مجهر فلوري أقدم. الميزة هي أن الفلورسنت قوي عند التكبير المنخفض، ولكن العيب هو أن الفلورسنت يتناقص مع زيادة التكبير. ولذلك، فمن الأفضل مراقبة المواد عينة أكبر.
2. المجهر الفلوري هو نوع جديد من المجهر الفلوري الذي تم تطويره في العصر الحديث. والفرق هو أن ضوء الإثارة يسقط من العدسة الموضوعية إلى سطح العينة، أي أنه يتم استخدام نفس العدسة الموضوعية كمكثف الإضاءة والعدسة الموضوعية لجمع الفلورة. يجب إضافة مقسم شعاع ثنائي اللون في مسار الضوء، والذي يبعد 45 درجة عن اليورانيوم الخفيف. ينعكس ضوء الإثارة في العدسة الشيئية ويتم تجميعه على العينة. يدخل الفلورسنت الناتج عن العينة وضوء الإثارة المنعكس عن سطح العدسة للعدسة الموضوعية وسطح الغطاء الزجاجي إلى العدسة الموضوعية في نفس الوقت، ويعود إلى مقسم الشعاع ثنائي اللون لجعل ضوء الإثارة منفصلاً عن الفلورسنت ، يتم امتصاص ضوء الإثارة المتبقي عن طريق حجب المرشحات. مثل التغيير إلى مزيج من مرشح الإثارة المختلف / مقسم الشعاع ذو اللونين / مرشح الحجب، فإنه يمكن أن يلبي احتياجات منتجات تفاعل الفلورسنت المختلفة. ميزة هذا النوع من المجهر الفلوري هي أن إضاءة مجال الرؤية تكون موحدة، والتصوير واضح، وكلما زاد التكبير، كلما كان الفلورة أقوى.
(2) كيفية استخدام المجهر الفلوري.
1. قم بتشغيل مصدر الضوء، ويحتاج مصباح الزئبق عالي الضغط إلى التسخين لبضع دقائق للوصول إلى النقطة الأكثر سطوعًا.
2. يحتاج مجهر مضان الإرسال إلى تثبيت مرشح الإثارة المطلوب بين مصدر الضوء والمكثف، وتثبيت مرشح الحجب المقابل خلف العدسة الموضوعية. تحتاج مجاهر برنامج التحصين الموسع-الأسفار إلى إدراج مرشح الإثارة المطلوب/فاصل شعاع مزدوج اللون/مرشح الحجب في الفتحات الموجودة في مسار الضوء.
3. راقب باستخدام عدسة منخفضة التكبير، واضبط مركز مصدر الضوء بحيث يقع في مركز بقعة الإضاءة بأكملها وفقًا لجهاز الضبط الخاص بنماذج مختلفة من المجاهر الفلورية.
4. ضع قطعة العينة ولاحظها بعد التركيز. يجب الانتباه أثناء الاستخدام: لا تراقب الفلتر النهائي مباشرة، حتى لا تسبب ضررًا للعين؛ عند مراقبة العينات باستخدام عدسة زيتية، يجب استخدام عدسة زيتية خاصة بدون مضان؛ بعد إيقاف تشغيل مصباح الزئبق عالي الضغط، لا يمكن تشغيله مرة أخرى على الفور، بل يجب اختباره. يمكن إعادة تشغيله بعد 5 دقائق، وإلا فإنه سيكون غير مستقر ويؤثر على عمر مصباح الزئبق.
(3) مراقبة الخلايا الملطخة بصبغة الفلورسنت البرتقالية أكريدين 0.01 في المائة تحت المجهر الفلوري على منصة التدريس باستخدام مرشح الضوء الأزرق البنفسجي. يتم تحفيز النواة والسيتوبلازم لإنتاج لونين مختلفين من التألق (الأخضر الداكن والبرتقالي والأحمر).
