المجهر الفلوري والمجهر الضوئي العادي الاختلافات والخصائص
يختلف المجهر الفلوري والمجهر الضوئي العادي، فليس من خلال إضاءة مصدر الضوء العادي لمراقبة العينة، ولكن باستخدام طول موجي معين من الضوء (عادةً الأشعة فوق البنفسجية، الضوء الأزرق البنفسجي) لإثارة مادة الفلورسنت داخل العينة تحت المجهر، بحيث لا يلعب مضان مصدر ضوء المجهر الفلوري إضاءة مباشرة، ولكن كنوع من إثارة مادة الفلورسنت داخل عينة مصدر الطاقة. السبب وراء تمكننا من ملاحظة العينة لا يرجع إلى إضاءة مصدر الضوء، ولكن ظاهرة التألق التي تقدمها مادة الفلورسنت في العينة بعد امتصاص الطاقة الضوئية الناتجة عن الإثارة. يمكن ملاحظة أن خصائص المجهر الفلوري، وخاصة مصدر الضوء الخاص به، يمكن أن توفر عددًا كبيرًا من نطاق الطول الموجي المحدد لضوء الإثارة، بحيث يمكن للمادة الفلورية الموجودة داخل العينة التي تم فحصها الحصول على الكثافة اللازمة لضوء الإثارة. وفي الوقت نفسه، يجب أن يكون لدى المجهر الفلوري نظام ترشيح مطابق. المجهر الفلوري هو الأداة الأساسية للكيمياء النسيجية الفلورة. وهو يتألف من مصدر ضوء عالي الضغط ونظام مرشح (بما في ذلك لوحة مرشح الإثارة والقمع) والنظام البصري ونظام التصوير الفوتوغرافي والمكونات الرئيسية الأخرى، وهو استخدام طول موجي معين من الضوء لتحفيز العينة لإصدار مضان.
1. طريقة إثارة الفلورسنت: وفقًا لنطاق الطول الموجي للضوء، يتم تقسيمها إلى طريقة إثارة الأشعة فوق البنفسجية (باستخدام الإضاءة فوق البنفسجية) وطريقة إثارة BV (باستخدام الضوء البنفسجي الأزرق) نوعان من طريقة إثارة الأشعة فوق البنفسجية أقصر من 400 نانومتر بالقرب من الأشعة فوق البنفسجية الإثارة. لا يوجد أي ضوء إثارة مرئي في هذه الطريقة، لذلك يُظهر الفلورسنت المرصود الفلورسنت المتأصل للصبغة، ومن السهل التمييز بين الفلورسنت المحدد في العينة والفلورسينس الذاتي لأنسجة الخلفية.
2. طريقة الإثارة BV: تتمحور الطريقة على 404 نانومتر، 434 نانومتر من الأشعة فوق البنفسجية إلى الضوء الأزرق للإثارة. تستخدم هذه الطريقة الضوء الأزرق لتشعيع العينة، لذلك يجب أن يستخدم مرشح القطع لنظام مراقبة الفلورسنت مرشحًا يمكنه حجب الضوء الأزرق تمامًا ويمكنه تمرير الفلورسينس الأخضر والأصفر المطلوب بشكل مناسب. أصباغ الفلورسنت لطريقة الأجسام المضادة الفلورية. نظرًا لأن الطول الموجي للحد الأقصى لامتصاص ضوء الإثارة والطول الموجي للحد الأقصى لانبعاث الفلورسنت قريبان من بعضهما البعض، فإن المرشحات المستخدمة في طريقة الإثارة BV يجب أن تكون مرشحات مقطوعة حادة. تستخدم هذه الطريقة الضوء الأزرق كضوء إثارة، وبالتالي تكون كفاءة امتصاص الفلوروكروم أعلى ويمكن الحصول على صورة أكثر سطوعًا. العيب هو أنه لا يمكن رؤية التألق تحت 500 نانومتر، وتظهر الصورة بأكملها باللون الأصفر فوق 500 نانومتر. في طريقة الأجسام المضادة الفلورية، يتم الحكم على معظم النوعية من خلال اللون الفريد للفلوروكروم، وبالتالي فإن عيوب طريقة إثارة BV الموصوفة أعلاه تميل إلى أن تكون مؤثرة للغاية عند مناقشة الخصوصية الدقيقة.
