ميزات وتطبيقات الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر
المجهر المتحد البؤر المسح بالليزر (LSCM) هو نوع من المجهر المصمم على أساس تقنية التركيز المتقارن ، أي لجعل مصدر ضوء الليزر والعينة قيد الاختبار والكاشف في وضع الاقتران لبعضهما البعض.
أساسي
في المجاهر العامة ، يتطابق المستوى البؤري للعدسة الموضوعية مع الكاشف بحيث يتم عزل مستوى الصورة المرصود عن المستوى المحوري المجاور ، بينما في المجاهر متحد البؤرة ، تضيء العينة باستخدام بقعة ضوئية محدودة الانعراج ، وفي يتم تحقيق تأثير العزل هذا باستخدام ثقب في مسار ضوء المجموعة عند النقطة المحورية لاتحاد البقعة لتصفية الضوء الشارد لتحسين الدقة.
ميزات التصوير
يمكن فقط للضوء المنعكس من طبقة العينة المترافقة أن يمر عبر الفتحة الصغيرة في مسار ضوء المجموعة ، ويتم حظر انعكاسات طبقة العينة غير ذات الصلة المتبقية بواسطة الفتحة الصغيرة. يمكن أن يؤدي هذا إلى زيادة كبيرة في الدقة. الموضح أدناه هو مقارنة جنبًا إلى جنب بين الفحص المجهري متعدد الأبعاد الفلوري والفحص المجهري متحد البؤر لنفس العينة السميكة. عندما يتم التقاط سلسلة من الصور في مستويات بؤرية مختلفة ، يمكن إنشاء ما يشار إليه عادةً باسم "z-stack" ، وتُظهر هذه الصورة كلاً من الدقة ومكاسب التباين التي يوفرها الفحص المجهري متحد البؤر والأسباب الكامنة وراء هذه المكاسب. يكشف فحص الصورة في الجزء العلوي من المكدس مع مستوى التصوير فوق النسيج عن الكثير من الضوء المتناثر في صورة التألق ، بينما تظهر الصورة متحد البؤر باللون الأسود. هذا الانخفاض في PSF في الاتجاه المحوري مسؤول بشكل مباشر عن الاختلاف في الدقة الملحوظ في الواجهة الضوئية في منتصف المكدس z.
ميزة أخرى للفحص المجهري متحد البؤر المسح بالليزر هي أنها تقنية تصوير بالمسح الضوئي. تضيء تقنية الإضاءة التقليدية ذات المجال الواسع العينة بأكملها ، بحيث يمكن التقاط الصورة مباشرة بالعين المجردة أو الكاشف ، لكن LSCM تستخدم شعاعًا أو أشعة مركزة متعددة تمر عبر العينة للمسح والتصوير ، وتكون الصورة الناتجة يسمى القسم البصري. يوضح ما يلي الفرق بين طريقة الإضاءة التقليدية ذات المجال الواسع وطريقة الإضاءة متحد البؤر بالمسح بالليزر.
لذلك ، تظهر طريقة عمل عملية لمجهر متحد البؤر في الشكل أدناه. يمر ضوء الإثارة المنبعث من الليزر عبر مرآة ثنائية اللون ويمسح الاتجاهين x و y للعينة من خلال زوج من المرايا المهتزة. إثارة (أو انعكاس) العينة يدخل الضوء إلى كاشف PMT من خلال الثقب ويتم تسجيله ، ويعيد الكمبيوتر تكوين صورة المسح المسجلة للحصول على صورة العينة الفعلية.
