العد المباشر بالمجهر للميكروبات
مبدأ تجريبي
العد المباشر تحت المجهر باستخدام مقياس الكريات هو طريقة عد ميكروبية شائعة الاستخدام. ميزة هذه الطريقة هي أنها سهلة الاستخدام وسريعة. ضع التعليق البكتيري المخفف بشكل مناسب (أو تعليق البوغ) في غرفة العد بين الشريحة وزجاج غطاء مقياس الهيموسيتومتر ، وعد تحت المجهر. نظرًا لأن حجم غرفة العد ثابت (0. 1 مم 2) ، يمكن تحويلها إلى إجمالي عدد الكائنات الحية الدقيقة لكل وحدة حجم وفقًا لعدد الكائنات الحية الدقيقة التي تمت ملاحظتها تحت المجهر. نظرًا لأن هذه الطريقة تحسب مجموع البكتيريا الحية والميتة ، فإنها تسمى أيضًا طريقة العد الكلي للبكتيريا.
عادة ما يكون مقياس الكريات الدموي عبارة عن شريحة زجاجية خاصة تشكل عليها أربعة أخاديد ثلاث منصات. المنصة في المنتصف مقسمة إلى نصفين بواسطة أخدود أفقي قصير. شبكة منقوشة على المنصة من كل جانب. كل شبكة مقسمة إلى تسعة مربعات كبيرة. المربع الكبير في المنتصف هو غرفة العد. يتم عد الكائنات الحية الدقيقة في غرفة العد. يظهر هيكل لوحة عد خلايا الدم في الشكل Ⅷ -1.
مقياس غرفة العد بشكل عام له نوعان من المواصفات ، أحدهما أن المربع الكبير مقسم إلى 16 مربعًا متوسطًا ، وكل مربع متوسط مقسم إلى 25 مربعًا صغيرًا (الشكل Ⅷ -2) ؛ الآخر عبارة عن مربع كبير. ينقسم المربع إلى 25 مربعًا متوسطًا ، وكل مربع متوسط مقسم إلى 16 مربعًا صغيرًا (الشكل Ⅷ -1 ، ج). ولكن بغض النظر عن نوع لوحة العد ، فإن عدد المربعات الصغيرة في كل مربع كبير هو نفسه ، أي 16 × 25=400 مربعًا صغيرًا ، كما هو موضح في الشكل Ⅷ -2.
يبلغ طول ضلع كل مربع كبير 1 مم ومساحة كل مربع كبير 1 مم 2. بعد تغطية زجاج الغطاء ، يكون الارتفاع بين الزجاج المنزلق وزجاج الغطاء 0. 1 مم ، وبالتالي فإن حجم غرفة العد هو 0. 1 مم 3.
عند العد ، عادةً ما يتم حساب العدد الإجمالي للبكتيريا في المربعات الخمسة الوسطى ، ثم الحصول على متوسط قيمة كل مربع متوسط ، ثم الضرب في 16 أو 25 للحصول على العدد الإجمالي للبكتيريا في مربع كبير ، ثم يتم التحويل إلى العدد الإجمالي للبكتيريا في 1 مل محلول بكتيري.
معدات المختبرات
مقياس الهيموسيتومتر ، المجهر ، الغطاء ، الشعيرات الدموية المعقمة ؛
المواد التجريبية
تعليق خميرة الخباز
الإجراء التجريبي (طريقة العد المباشر بالمجهر الميكروبي)
1. التخفيف
يخفف بشكل صحيح تعليق Saccharomyces cerevisiae. إذا لم يكن المحلول البكتيري سميكًا ، فلا داعي للتخفيف.
2. غرفة العد المجهري
قبل إضافة العينات ، قم بإجراء فحص مجهري لغرفة العد بلوحة العد. إذا كان هناك أوساخ ، فيجب تنظيفها قبل العد.
3. إضافة عينة
قم بتغطية لوحة مقياس الكريات الدموية النظيفة والجافة بغطاء زجاجي ، ثم استخدم قطارة معقمة ذات فم ناعم لإسقاط قطرة صغيرة من محلول Saccharomyces cerevisiae المخفف من حافة زجاج الغطاء (ليس كثيرًا) ، بحيث يكون محلول البكتيريا قريب من الفجوة على طول الفجوة. يدخل التناضح الشعري إلى غرفة العد من تلقاء نفسه ، ويمكن ملء غرفة العد العامة بسائل بكتيري. احرص على عدم وجود فقاعات هواء.
4. العد المجهر
بعد الراحة لمدة 5 دقائق ، ضع مقياس الهيموسيتومتر على مرحلة المجهر ، واستخدم أولاً عدسة منخفضة الطاقة للعثور على موقع غرفة العد ، ثم قم بالتبديل إلى عدسة عالية الطاقة للعد. إذا وجد أن المحلول البكتيري سميك جدًا أو رقيق جدًا قبل العد ، فمن الضروري إعادة ضبط التخفيف قبل العد. بشكل عام ، يتطلب تخفيف العينة حوالي 5-10 بكتيريا في كل خلية. تختار كل غرفة عد البكتيريا في 5 شبكات وسطى (4 زوايا اختيارية وشبكات مركزية) للعد. يتم حساب البكتيريا الموجودة على خط الشبكة بشكل عام فقط في الخطين العلوي والأيمن. في حالة تبرعم الخميرة ، عندما يصل حجم برعم الجسم إلى نصف الخلية الأم ، عد نوعين من البكتيريا. عد عينة لحساب المحتوى البكتيري للعينة من القيم التي تم عدها في غرفتي العد.
5. تنظيف عداد الكريات
بعد الاستخدام ، اشطف لوحة عد خلايا الدم الموجودة على الصنبور بضخ الماء ، ولا تغسله بأشياء صلبة ، وجففها بنفسك أو بمجفف شعر بعد الغسيل. الفحص المجهري ، لاحظ ما إذا كانت هناك بكتيريا متبقية أو رواسب أخرى في كل خلية. إذا لم تكن نظيفة ، فيجب غسلها بشكل متكرر حتى تصبح نظيفة.
