الاختلافات والخصائص بين المجهر الفلوري والمجهر الضوئي العادي
المجهر الفلوري يختلف عن المجهر الضوئي العادي. لا يلاحظ العينة من خلال إضاءة مصدر الضوء العادي. بدلاً من ذلك، يستخدم ضوءًا بطول موجي معين (عادةً الضوء فوق البنفسجي، الضوء الأزرق البنفسجي) لإثارة مادة الفلورسنت في العينة تحت المجهر، مما يؤدي إلى انبعاث الفلورسنت. ولذلك، فإن مصدر الضوء للمجهر الفلوري لا يعمل كإضاءة مباشرة، ولكن كمصدر للطاقة يثير المادة الفلورية الداخلية للعينة. السبب وراء تمكننا من ملاحظة العينة لا يرجع إلى إضاءة مصدر الضوء، ولكن ظاهرة التألق الناتجة عن امتصاص مادة الفلورسنت في العينة لطاقة الضوء المثارة. يمكن ملاحظة أن السمة الرئيسية للمجهر الفلوري هي أن مصدر الضوء الخاص به يمكن أن يوفر كمية كبيرة من ضوء الإثارة في نطاق طول موجي محدد، بحيث يمكن للمواد الفلورية في العينة قيد الفحص الحصول على الكثافة اللازمة لضوء الإثارة. وفي الوقت نفسه، يجب أن تحتوي المجاهر الفلورية على أنظمة ترشيح مقابلة. المجهر الفلوري هو أداة أساسية للكيمياء النسيجية الفلورة المتقدمة. وهو يتألف من مصدر ضوء عالي الضغط ونظام مرشح (بما في ذلك لوحات مرشح الإثارة والقمع) والنظام البصري ونظام التصوير الفوتوغرافي. يستخدم ضوءًا بطول موجي معين لإثارة العينة لإصدار مضان.
1. طرق إثارة الفلورة: حسب مدى الطول الموجي للضوء تنقسم إلى نوعين: طريقة إثارة الأشعة فوق البنفسجية (باستخدام طريقة الإضاءة فوق البنفسجية) وطريقة إثارة BV (باستخدام الضوء الأزرق البنفسجي). تستخدم طريقة الإثارة بالأشعة فوق البنفسجية ضوءًا قريبًا من الأشعة فوق البنفسجية أقصر من 400 نانومتر للإثارة. لا يوجد أي ضوء إثارة مرئي في هذه الطريقة، لذلك يُظهر التألق المرصود التألق المتأصل للصبغة، مما يجعل من السهل التمييز بين التألق المحدد في العينة والتألق الذاتي لأنسجة الخلفية.
2. طريقة الإثارة BV: الإثارة من الأشعة فوق البنفسجية إلى الضوء الأزرق المتمركزة عند 404 نانومتر و434 نانومتر. تستخدم هذه الطريقة الضوء الأزرق لإضاءة العينة، لذا يجب أن يستخدم مرشح القطع لنظام مراقبة الفلورسنت مرشحًا يمكنه حجب الضوء الأزرق تمامًا وتمرير الفلورسين الأخضر والأصفر المطلوب بشكل كامل. الأصباغ الفلورية المستخدمة في طرق الأجسام المضادة الفلورية. الحد الأقصى لطول موجة الامتصاص لضوء الإثارة والحد الأقصى لطول موجة الانبعاث للفلورة قريبان نسبيًا، لذلك يجب أن يستخدم المرشح المستخدم في طريقة الإثارة BV مرشح قطع حاد. يمكن لهذه الطريقة استخدام الضوء الأزرق كضوء إثارة، وبالتالي فإن كفاءة امتصاص أصباغ الفلورسنت أعلى ويمكن الحصول على صور أكثر سطوعًا. العيب هو أنه لا يمكن رؤية التألق تحت 500 نانومتر، في حين أن التألق فوق 500 نانومتر يجعل الصورة بأكملها تظهر باللون الأصفر. في طريقة الأجسام المضادة الفلورية، يتم الحكم على خصوصية صبغة الفلورسنت في الغالب من خلال لونها الفريد. ولذلك، عند مناقشة خصوصية خفية، فإن أوجه القصور المذكورة أعلاه في أسلوب الإثارة BV غالبا ما يكون لها تأثير كبير.
