الفرق بين المجهر الفلوري والمجهر العادي
لقد حاولت مؤخرًا صنع بعض المقاطع المجمدة من الفئران. بعد ذلك، سأستخدم المجهر الفلوري لمعرفة ما إذا كان الفيروس الذي حقنته موجودًا في منطقة الدماغ التي أريدها. هناك حاجة إلى تعلم بعض المبادئ الأساسية للمجهر الفلوري باختصار، وسوف أشاركها هنا.
تستخدم المجاهر الفلورية الضوء فوق البنفسجي كمصدر للضوء لإضاءة الجسم الذي يتم فحصه، مما يتسبب في انبعاث ضوء من الجسم، ثم مراقبة الجسم تحت المجهر. وهي تستخدم أساسا للخلايا المناعية. وهي تتألف بشكل رئيسي من مصدر الضوء، ونظام لوحة الترشيح والنظام البصري. يتم ملاحظة الصورة الفلورية للعينة من خلال تكبير العدسة والعدسة الشيئية. دعونا نلقي نظرة على الفرق بين المجهر الفلوري والمجهر الضوئي العادي.
1. انظر إلى طريقة الإضاءة
إن طريقة إضاءة المجهر الفلوري بشكل عام هي الإضاءة الفوقية، مما يعني وضع مصدر الضوء على عينة الاختبار من خلال العدسة الموضوعية.
2. انظر إلى القرار
تستخدم المجاهر الفلورية الضوء فوق البنفسجي كمصدر للضوء، والذي له طول موجي أقصر ولكن دقة أعلى من المجاهر الضوئية العادية.
3. الاختلافات في المرشحات
تستخدم المجاهر الفلورية مرشحين خاصين، أحدهما يستخدم أمام مصدر الضوء لتصفية الضوء المرئي، والآخر يستخدم بين العدسة الشيئية والعدسة العينية لتصفية الأشعة فوق البنفسجية، والتي يمكن أن تحمي عيون الإنسان.
المجهر الفلوري هو أيضًا نوع من المجهر الضوئي. السبب الرئيسي هو أن الطول الموجي المثار بواسطة المجهر الفلوري قصير، مما يؤدي إلى اختلاف في البنية والاستخدام بين المجهر الفلوري والمجهر العادي. تتمتع معظم المجاهر الفلورية بوظيفة جيدة في التقاط الضوء الضعيف. ، لذا فإن قدرتها على التصوير تكون جيدة أيضًا في ظل مضان ضعيف للغاية. إلى جانب التحسين المستمر للمجاهر الفلورية في السنوات الأخيرة، تم أيضًا تقليل الضوضاء بشكل كبير. ولذلك، يتم استخدام المزيد والمزيد من المجاهر مضان.
المعرفة حول المجهر الفلوري ثنائي الفوتون
المبدأ الأساسي للإثارة ثنائي الفوتون هو: في ظل حالة كثافة الفوتون العالية، يمكن لجزيئات الفلورسنت أن تمتص فوتونين طويلي الطول الموجي في نفس الوقت، وبعد فترة قصيرة تسمى عمر الحالة المثارة، تنبعث فوتونًا بطول موجي أقصر . التأثير مماثل لاستخدام فوتون طوله الموجي نصف الطول الموجي الطويل لإثارة جزيئات الفلورسنت. تتطلب الإثارة ثنائية الفوتون كثافة فوتون عالية. من أجل عدم إتلاف الخلايا، تستخدم المجاهر ثنائية الفوتون أشعة ليزر نبضية ذات وضع مغلق عالي الطاقة. يصدر هذا الليزر ضوء ليزر ذو طاقة ذروة عالية ومتوسط طاقة منخفض، بعرض نبضة يبلغ 100 فمتوثانية فقط وتردد من 80 إلى 100 ميجاهرتز. عند استخدام عدسة موضوعية ذات فتحة عددية عالية لتركيز فوتونات الليزر النبضي، تكون كثافة الفوتون عند تركيز العدسة الهدف هي الأعلى. يحدث الإثارة ثنائية الفوتون فقط عند تركيز العدسة الشيئية، وبالتالي فإن المجهر ثنائي الفوتون لا يتطلب ثقبًا متحد البؤر، مما يحسن كفاءة اكتشاف الفلورسنت.
في ظاهرة التألق العامة، نظرًا لانخفاض كثافة الفوتون في ضوء الإثارة، يمكن لجزيء الفلورسنت أن يمتص فوتونًا واحدًا فقط في نفس الوقت ثم ينبعث فوتونًا فلوريًا واحدًا من خلال انتقال إشعاعي. هذا هو مضان فوتون واحد. بالنسبة لعملية إثارة التألق باستخدام الليزر كمصدر للضوء، قد تحدث ظواهر فلورية ثنائية الفوتون أو حتى متعددة الفوتون. في هذه الحالة، تكون شدة مصدر ضوء الإثارة المستخدم عالية، وتفي كثافة الفوتون بمتطلبات جزيئات الفلورسنت لامتصاص فوتونين في نفس الوقت. في عملية استخدام الليزر العادي كمصادر للضوء الإثارة، لا تزال كثافة الفوتون غير كافية لإنتاج امتصاص ثنائي الفوتون. عادةً ما يتم استخدام ليزر نبض الفيمتو ثانية، ويمكن أن تصل قوتها اللحظية إلى مستوى الميغاواط. ولذلك، فإن الطول الموجي لمضان ثنائي الفوتون أقصر من الطول الموجي لضوء الإثارة، وهو ما يعادل التأثير الناتج عن إثارة الطول الموجي نصف الإثارة.
