تحديد التجمعات الميكروبية – طريقة العد المجهري المباشر!
I. متطلبات الغرض
1، لتوضيح مبدأ عد لوحة الهيماتوكريت.
2,إتقان طريقة العد الميكروبي باستخدام لوحة الهيماتوكريت.
ثانيا. المبادئ الأساسية
طريقة العد المباشر بالمجهر هي عبارة عن كمية صغيرة من تعليق العينة المراد اختبارها على شريحة خاصة بمساحة وحجم محددين (المعروف أيضًا باسم العداد البكتريولوجي)، في المجهر يتم العد مباشرة بطريقة بسيطة وسريعة وبديهية. في الوقت الحاضر، العدادات البكتريولوجية المحلية والأجنبية شائعة الاستخدام هي: لوحة عد خلايا الدم، وعدادات بيتروف هاوزر البكتريولوجية وعدادات هوكسلي البكتريولوجية، وما إلى ذلك، والتي يمكن استخدامها للخميرة والبكتيريا وجراثيم العفن وغيرها من معلقات العد، والمبدأ الأساسي هو نفسه. النوعان الأخيران من العدادات لهما إجمالي حجم 0.02 مم 3 بعد وضع غطاء الغطاء، وتكون المسافة بين غطاء الغطاء والشريحة الحاملة 0.02 مم فقط، لذا فإن الخلايا الأصغر مثل يمكن ملاحظة البكتيريا وحسابها بهدف الغمر بالزيت. بالإضافة إلى استخدام هذه العدادات، هناك أيضًا طريقة لتقدير نسبة مساحة اللطاخة إلى مساحة مجال الرؤية التي يتم ملاحظتها مباشرة تحت المجهر، والتي تستخدم بشكل عام للفحص البكتريولوجي لحليب البقر. مزايا طريقة العد المجهري المباشر بديهية وسريعة وسهلة التشغيل. ومع ذلك، فإن عيب هذه الطريقة هو أن النتيجة عادة ما تكون مجموع الكائنات الحية والميتة. هناك بعض الطرق للتغلب على هذا العيب، مثل الجمع بين البكتيريا الحية الملطخة بثقافة الغرفة الدقيقة (وقت قصير) وإضافة مثبطات التحريك الخلوي لتحقيق غرض عد الكائنات الحية فقط.
خطوات العملية
1، إعداد تعليق البكتيرية
استخدم محلول ملحي معقم لعمل المعلق البكتيري لخميرة البيرة بتركيز مناسب.
2، غرفة عد المرآة
قبل إضافة العينات، يجب فحص غرفة العد بلوحة العد أولاً. إذا كان هناك أي أوساخ، فيجب تنظيفها وتجفيفها قبل العد.
3، إضافة العينات
لوحة عد خلايا الدم النظيفة والجافة المغطاة بغطاء ساترة، ثم استخدم سحاحة شعرية معقمة لهز تعليق خميرة البيرة من حافة غطاء الغطاء لإسقاط قطرة صغيرة، بحيث يتدفق السائل البكتيري على طول الفجوة عن طريق اختراق الشعيرات الدموية إلى داخل غرفة العد تلقائيا، غرفة العد عموما يمكن ملؤها بالسائل البكتيري. عند أخذ العينات، يجب رج المحلول البكتيري جيدًا أولاً؛ عند إضافة العينات، يجب ألا تحتوي غرفة العد على فقاعات هواء.
4، العد المجهر
بعد إضافة العينة، اتركها لمدة 5 دقائق، ثم ضع لوحة عد خلايا الدم على مرحلة حامل المجهر، وابحث أولاً عن موقع غرفة العد ذات التكبير المنخفض، ثم قم بتغييرها إلى التكبير العالي للعد. اضبط شدة ضوء المجهر بشكل مناسب، بالنسبة للمجهر الذي يحتوي على ضوء عاكس، يجب أيضًا الانتباه إلى أن الضوء لا ينبغي أن يكون متحيزًا إلى جانب واحد، وإلا فلن يكون مجال الرؤية سهلاً لخط شبكة غرفة العد الواضح، أو رؤية الخط العمودي فقط أو رؤية الخط الأفقي فقط. إذا وجد أن السائل البكتيري سميك جدًا أو رقيق جدًا قبل العد، فمن الضروري إعادة ضبط التخفيف قبل العد. تعتبر متطلبات تخفيف العينة العامة لحوالي 5 إلى 10 بكتيريا في كل خلية مناسبة. لكل غرفة عد، يتم اختيار الكائنات الحية الموجودة في 5 حجرات وسطى (4 زوايا وحجرة وسطى واحدة في المركز) للعد. عادةً ما يتم حساب الكائنات الحية الموجودة على خطوط الشبكة فقط على الخطوط العلوية والأيمن. في حالة تبرعم الخميرة، عندما يصل جسم التبرعم إلى نصف حجم الخلية الأم، يتم احتسابه ككائنين حيين. عد عينة من غرفتي العد بالقيمة المتوسطة لحساب المحتوى البكتيري للعينة.
5. تنظيف صفيحة الهيماتوكريت
بعد الاستخدام، اشطف لوحة عد خلايا الدم بالماء تحت الصنبور، ولا تستخدم أشياء صلبة للغسل والتنظيف، أو جففها بنفسك أو استخدم مجفف الشعر لتجفيفها بعد الغسيل. قم بفحص اللوحة مجهريا لمعرفة ما إذا كان هناك أي كائنات متبقية أو رواسب أخرى في كل حجرة. وإذا لم يكن نظيفاً فيجب إعادة الغسل حتى يصبح نظيفاً.
