الفحص المجهري الحيوي فيما يتعلق بحجم كتل الأنسجة
الفحص المجهري البيولوجي حتى الآن، يعد التثبيت البارد والقسم المجمد فائق النحافة والتجفيف بالتجميد من الطرق الروتينية للمقاطع المجهرية للأنسجة والخلايا بالأشعة السينية. وتفاصيل هذه الطريقة موضحة على النحو التالي:
بالنسبة للمجاهر البيولوجية ذات المكثف، يمكن تحريك المكثف لأعلى ولأسفل لجعل السطوع معتدلاً، ويمكن أيضًا تغيير فتحة الضوء المتغير لتحقيق سطوع معتدل 9 ب. إذا كان الضوء مشمسًا، يمكن رفع المكثف بشكل مناسب، ويمكن تكبير فتحة مصدر الضوء المتغير بشكل مناسب. إذا كان الضوء قويًا جدًا، فيمكن خفض عدسة المكثف بشكل مناسب، ويمكن تقليل فتحة الضوء المتقاطع بشكل مناسب. إذا كنت لا تزال تشعر بالإبهار في هذه الحالة، يمكنك اختيار الفلتر المناسب ووضعه على الحامل الموجود أسفل المكثف. ستتمكن هذه البلوط من الحصول على السطوع الذي يرضيك. وبالطبع فإن ضبط الوضعين العلوي والسفلي للمكثف وضبط حجم فتحة القراءة الضوئية المتغيرة واختيار المرشح المناسب يتطلب فترة معينة من التدريب لاكتساب الخبرة.
هناك مسألة مهمة جدًا في الفحص المجهري البيولوجي وهي أنه في عملية أخذ العينات وفصل الخلايا، بعد التجفيف بالتجميد وتضمين الراتنج (FD)، وبعد تجميد الركام الرقيق جدًا، وبعد التجفيف بالتجميد، يتم تحديد محتوى 65 عنصرًا في كل جزء يجب التعامل معها بعناية. لا يمكن أن تتضرر الخلايا المراد تحليلها. لأن التحليل الدقيق للأشعة السينية لا يتضمن العديد من الخطوات فحسب، بل يكلف الكثير أيضًا. إذا كانت الخلايا التي تم تحليلها عبارة عن خلايا تالفة أو خلايا ميتة بعد فترة طويلة ومعالجة متعددة الخطوات، فمن المؤسف للغاية استخلاص استنتاجات خاطئة. على سبيل المثال، الخلايا العضلية القلبية التي يتم فصلها عن طريق علاج الكولاجيناز لها شكلان، أحدهما طويل على شكل قضيب والآخر مستدير. هذه الأخيرة هي الخلايا الميتة التي تضررت أثناء عزل الخلية.
الفحص المجهري الحيوي تختلف كمية وتوزيع الشوارد في هذين النوعين من الخلايا تمامًا. Na مرتفع جدًا وK منخفض جدًا في الخلايا العضلية القلبية الدائرية، وتركيز الكالسيوم في الديدان الخيطية مرتفع جدًا. بعد التحقق من طرق التحليل الأخرى، ثبت أن ارتفاع Na وانخفاض K في الخلايا المستديرة وارتفاع Ca في الميتوكوندريا يرجعان إلى تلف غشاء الخلية أثناء عملية فصل الخلايا. عادة ما تكون طريقة تثبيت الخلايا والأنسجة بالثلج البارد هي التبريد والتثبيت أولاً، ثم تخزينها في النيتروجين السائل. تثبيت التبريد مهم جدًا لتأثير الحفظ. الخلايا الحية أو الأنسجة الطازجة غنية بالمياه. عند التبريد، غالبًا ما يتم تجميد أجزاء الخلايا أو الأنسجة التي تكون على اتصال مباشر مع مادة التبريد المسحوقة (خاصة عند التبريد بالنيتروجين السائل) وتثبيتها أولاً، وبالتالي تشكل "قشرة"، مما يعيق الأجزاء المركزية للخلايا. سحقت وثبتت على البارد. لذلك، عند إجراء تحليل المنطقة الدقيقة على شكل X، غالبًا ما يتبين وجود بلورات ثلجية في وسط الخلايا الأكبر حجمًا. ومن أجل منع حدوث ذلك، يتم استخدام مادة ذات نقطة انصهار أعلى من نقطة انصهار النيتروجين السائل ولكنها أقل من 806c كمبرد مكسور. هناك العديد من هذه المواد، ولكن أرخصها هو البروبان المركز (درجة الغليان - 42.120c، نقطة الانصهار - 187.10c، الوزن الجزيئي 44.1)، وسرعة التبريد هي الأسرع. لكن عيبه أنه قابل للاشتعال.
يمكن للمجهر البيولوجي وضع ألياف العضلات على رف خاص، بحيث عندما يصل تقلص ألياف العضلات إلى مرحلة معينة ويحتاج إلى التثبيت، ابدأ على الفور الفوهة لرش البروبان السائل على ألياف العضلات لإرواءها وإصلاحها. ثم يتم إخراج ألياف العضلات مع الإطار ووضعها في النيتروجين السائل. في حالة تثبيت خلايا الدم أو الخلايا المعزولة، قم أولاً بتركيز الخلايا عن طريق الطرد المركزي بسرعة منخفضة، ونقل الخلايا إلى قارورة فضية ذات توصيل حراري جيد، ووضع القارورة في البروبان السائل، وتجميدها للتثبيت. عند تثبيت بنكرياس الجرذ في مختبر هول، تم تبريد الكتلتين الفولاذيتين مسبقًا بالهيليوم السائل (أو النيتروجين السائل)، وتم تثبيت الكتلتين النحاسيتين بالملقط ووضعهما على الجزء الأمامي والخلفي من البنكرياس لإرواءه وتثبيته. البنكرياس. يمكن تخزين الأنسجة أو الخلايا في النيتروجين السائل للتخزين على المدى الطويل بعد التبريد والتثبيت.
الفحص المجهري البيولوجي بالإضافة إلى طريقة القسم المجمد الأكثر احترامًا، هناك تقنية ترسيب أخرى يستخدمها العلماء. تتم إضافة مادة لتكوين رواسب مع المكون المراد تحليله لتثبيته قبل التحليل، ومن ثم يتم تحليل الرواسب. على سبيل المثال، غالبًا ما يستخدم الأشخاص الأوكسالات والبيروانتيمونات لترسيب الكالسيوم في الخلايا العضلية. الأول ليس حساسًا بدرجة كافية للتركيز المنخفض لـ Ca في السيتوبلازم؛ يعتبر البايروانتيمونات أكثر حساسية ويمكن أن يشكل رواسب كثيفة الإلكترونات مع الكالسيوم الحر في الدماغ، لكن البايروانتيمونات غير متوافق مع الصوديوم والمنغنيز والباريوم والحديد. كما يتم تشكيل رواسب أقل تحديدًا. تشبه عملية تحضير العينة تحضير عينات مقطعية رفيعة للغاية بالمجهر الإلكتروني العادي، والفرق هو أن 3 بالمائة من بايروأنتيمونات البوتاسيوم (محلول فوسفات ملحي، درجة الحموضة 7.6) تم تثبيتها لمدة 6 ساعات قبل التثبيت، وعلى أقسام العضلات الرقيقة المصبوغة، شوهدت رواسب سوداء في الخطوط الوسطى للنطاقين A و2 من كل قسيم عضلي، واستخدمت المقاطع غير الملوثة للتحليل الدقيق للأشعة السينية. تم استخدام ديامينوبنزيدين رباعي هيدروكلوريد (DAB) لترسيب المواد المحتوية على الهيم وما إلى ذلك. يمكن النظر في الجمع بين تفاعل الترسيب النسيجي الكيميائي وجسر التمايز الدقيق للأشعة السينية في المختبرات التي لا تحتوي على ظروف قسم سامسونج متجمد. يمكن إجراء التحليل شبه الكمي وفقًا لذروة ارتفاع العناصر المراد تحليلها
