الفحص المجهري البيولوجي على حجم كتل الأنسجة
الفحص المجهري الحيوي حتى الآن، يعد التثبيت بالثلج البارد والمقاطع الرقيقة المجمدة والمعالجة الجافة المجمدة من الطرق الروتينية للحقول الدقيقة للأشعة السينية للأنسجة والخلايا. وتفاصيل الطريقة موضحة في النقاط التالية:
المجاهر البيولوجية يمكن تحريك المجاهر ذات العدسات المكثفة لأعلى ولأسفل لتحقيق سطوع معتدل، أو يمكن تغيير فتحة موسع الضوء المتغير لتحقيق سطوع معتدل 9 ب. إذا كان الضوء مشمسًا، يمكن رفع نطاق الإكتشاف بشكل مناسب، ويمكن توسيع فتحة الضوء المتغير بشكل مناسب. إذا كان الضوء قويًا جدًا، فيمكن أن تكون مرآة الضوء موجهة للأسفل، وتقفز فتحة الضوء المتغير للتقليل المناسب. إذا كنت لا تزال تشعر بالعمى في هذه الحالة، فيمكنك اختيار الفلتر المناسب الذي يتم وضعه في الحامل الموجود أسفل دائرة الضوء. يمكن الحصول على هذا ليجعلك راضيًا عن السطوع. بالطبع، في تعديل المواضع العلوية والسفلية لعدسة المكثف يمكن أن يختلف حجم فتحة قراءة الضوء واختيار المرشحات المناسبة، أي بعد فترة معينة من الممارسة والخبرة.
المجهر البيولوجي هناك مسألة مهمة جدًا وهي عملية أخذ العينات وفصل الخلايا، والتجفيف بالتجميد والتضمين بالراتنج (FD) بعد تجميد الكتيبات الفائقة، ويجب تجفيف التجميد بعد التشغيل الدقيق لكل جزء من محتوى التركيبة العنصرية البالغ عددها 65. يتم التعامل معها بحذر شديد، ويجب ألا تلحق الضرر بالخلايا المراد مراقبتها وتحليلها. لأن تحليل المنطقة الدقيقة بالأشعة السينية لا يتطلب خطوات كثيرة فقط، والتكلفة مرتفعة للغاية، إذا كانت الخلايا التي تم تحليلها بعد وقت طويل وخطوات متعددة من المعالجة، هي خلايا تالفة أو خلايا ميتة، لاستخلاص استنتاجات خاطئة أمر مؤسف للغاية. على سبيل المثال، تحتوي الخلايا العضلية المعزولة عن طريق علاج الكولاجيناز على شكلين، أحدهما طويل على شكل قضيب والآخر مستدير. هذه الأخيرة هي الخلايا الميتة التي تضررت أثناء عزل الخلية.
الفحص المجهري الحيوي يختلف محتوى وتوزيع الشوارد في هذين النوعين من الخلايا اختلافًا كبيرًا. كان Na مرتفعًا جدًا وK منخفضًا جدًا في الخلايا العضلية القلبية المستديرة، وكان تركيز الكالسيوم مرتفعًا جدًا في الميتوكوندريا. بعد التحقق من الطرق التحليلية الأخرى، تبين أن ارتفاع الصوديوم وانخفاض البوتاسيوم في الخلايا المستديرة وارتفاع الكالسيوم في الميتوكوندريا كانا نتيجة للضرر الذي لحق بغشاء الخلية أثناء فصل الخلية. غالبًا ما يتم التثبيت البارد للخلايا والأنسجة عن طريق التثبيت المروي متبوعًا بالحفظ في النيتروجين السائل. تثبيت الإرواء مهم لفعالية الحفظ. تكون الخلايا الحية أو الأنسجة الطازجة غنية بالماء، فعند التبريد غالباً ما تكون الخلايا أو الأنسجة والعامل البارد (خصوصاً مع النيتروجين السائل النقي البارد) ملامسين مباشرة لأجزاء التثبيت بالتجميد الأول، وبالتالي تشكل "القشرة"، التي يمنع مركز الخلية من التثبيت البارد. ونتيجة لذلك، غالبًا ما يتم العثور على بلورات الثلج في وسط الخلايا الأكبر حجمًا أثناء تحليل الخلايا الدقيقة بالأشعة السينية. ومن أجل منع حدوث ذلك، يتم استخدام المواد ذات نقطة انصهار أعلى من النيتروجين السائل ولكن أقل من 806 درجة مئوية جافة كعوامل تبريد. هناك العديد من هذه المواد، ولكن * من السهل الحصول عليها، وغير مكلفة، وهي البروبان المركز (درجة غليانها 42.120 درجة مئوية، نقطة الانصهار 187.10 درجة مئوية، الوزن الجزيئي 44.1)، معدل التبريد * سريع. ومع ذلك، فمن عيوبه أنه قابل للاشتعال.
يمكن وضع المجهر البيولوجي على رف خاص من ألياف العضلات، بحيث يحتاج تقلص الألياف العضلية للوصول إلى مرحلة زمنية معينة إلى التثبيت، ابدأ الفوهة على الفور، بحيث يصل البروبان السائل إلى ألياف العضلات، بحيث يتم تبريدها البرد ثابت. ثم يتم إخراج الألياف العضلية مع الحامل ووضعها في النيتروجين السائل. في حالة تثبيت خلايا الدم أو الخلايا المعزولة، يتم أولاً استخدام الطرد المركزي منخفض السرعة لجعل الخلايا مركزة، وسيتم نقل الخلايا إلى موصلية حرارية جيدة للأنبوب الفضي، ويتم تثبيت الأنبوب في ذبيحة البروبان السائل على البارد. مختبر قاعة البنكرياس الثابتة للفئران، أول قطعتين من الفولاذ مع الهيليوم السائل (أو النيتروجين السائل) قبل التبريد، مع مشبك مثبت، سيتم وضع قطعتين من النحاس أمام البنكرياس وخلفه، بحيث تكون عمة البنكرياس تثبيت الغدة بالتبريد. يمكن تخزين الأنسجة أو الخلايا في النيتروجين السائل لفترة طويلة بعد التبريد والتثبيت.
