تطبيق مجهر مضان الانعكاس الداخلي الكلي
TIRFM (مجهر مضان الانعكاس الداخلي الكلي) ، مجهر مضان للانعكاس الداخلي الكلي ، عندما يدخل الضوء إلى وسيط مع معامل انكسار منخفض من وسيط بمؤشر انكسار عالٍ ، إذا كانت زاوية السقوط كبيرة بدرجة كافية ، ينعكس كل الضوء بدون انكسار ، ولكن في واجهة الوسيطتين تنتج موجات زائلة يمكن أن تثير التألق في حدود 100 نانومتر بالقرب من الواجهة لتحقيق مراقبة سطح الكائن. يمكن إرسال ضوء الإثارة من خلال منور مجهر مضان تقليدي أو منور خاص ، ويمكن التحكم في زاوية سقوط الليزر. يتم استخدام طريقة الإثارة الميدانية اللحظية لمنع ضوء الإثارة من دخول الكاشف. ينتج ضوء الإثارة الموجود في الواجهة بين الزجاج والماء داخليًا كاملًا يتم تنفيذه بالانعكاس. نظرًا للتوهين الأسي لضوء الإثارة ، فإن منطقة العينة القريبة جدًا من سطح الانعكاس الكلي فقط ستنتج انعكاسًا مضانًا ، مما يقلل بشكل كبير من تداخل ضوضاء ضوء الخلفية مع هدف المراقبة ، لذلك تُستخدم هذه التقنية على نطاق واسع في المراقبة الديناميكية من مواد سطح الخلية.
رسم تخطيطي لمجهر الانعكاس الداخلي الكلي (TIRFM)
عينة مدى موجة متوهجة غطاء زجاج غمر الزيت ⑤ الهدف ⑥ شعاع الانبعاث (إشارة) ⑦ شعاع الإثارة
من أجل تحقيق الانعكاس الداخلي الكلي ، يلزم وجود زاوية سقوط كبيرة ، على سبيل المثال ، زاوية السقوط في واجهة الزجاج والمياه أكبر من 61 درجة. يمكن تحقيق ذلك من خلال منشور يسمى TIRFM القائم على المنشور ، أو عن طريق عدسة موضوعية ذات فتحة عددية عالية ، والتي تسمى TIRFM من النوع الموضوعي. مجهر الانعكاس الداخلي الكلي الحالي التجاري هو بشكل عام من نوع العدسة الموضوعية ، بسرعة عالية ودقة عالية.
يستخدم مجهر الانعكاس الداخلي الكلي على نطاق واسع في بعض المجالات البيولوجية لأنه يمكن أن يحقق مراقبة التألق في نطاق رفيع جدًا (أقل من 100 نانومتر) على سطح الأشياء. مثل التطبيقات التالية:
مراقبة صور سطح الخلية: بنية سطح غشاء الخلية ، ملامسة سطح الخلية ، ديناميات سطح الغشاء / توطين البروتين.
مراقبة الجزيء المفرد ومعالجته: الميوسين والأكتين والسيبي 3- المسمى ATP.
حركة سطح غشاء الخلية: مثل ابتلاع الحويصلة ، زفير الحويصلة ، والحويصلة الخارجية الصماء. ال
مراقبة ظاهرة تسبب الكالسيوم في غشاء الخلية ، مراقبة القناة الأيونية.
أبحاث المحركات الجزيئية: المحركات الدورانية ، بروتينات الهيكل الخلوي ، البوليمرات ، بروتينات G ، البروتينات الحلقية ، المحركات النوكليوتيدية.
بالإضافة إلى مجال علم الأحياء ، فإنه يحتوي أيضًا على تطبيقات جيدة في مجال الكيمياء لمراقبة الهياكل الجزيئية الكيميائية.
