الفوائد المتقدمة للمجاهر متعددة الفوتون للمسح بالليزر
يعد المسح المجهري متعدد الفوتون بالليزر تحسينًا كبيرًا في الفحص المجهري البصري، والذي يتجلى بشكل أساسي في القدرة على مراقبة الهياكل العميقة للخلايا الحية والخلايا الثابتة والأنسجة، والحصول على هياكل مستوية واضحة وحادة ومتعددة-طبقات Z-، وتحديدًا الشرائح الضوئية، والتي يمكن استخدامها لإنشاء هياكل صلبة ثلاثية الأبعاد- للعينات. يستخدم المجهر متحد البؤر مصدر ضوء الليزر، والذي يتم توسيعه لملء المستوى البؤري بأكمله للعدسة الشيئية، ثم يتقارب في نقاط صغيرة جدًا على المستوى البؤري للعينة من خلال نظام العدسة للعدسة الشيئية. وفقًا للفتحة العددية للعدسة الموضوعية، يبلغ قطر نقطة الإضاءة الأكثر سطوعًا حوالي 0.25-0.8 ميكرومتر، والعمق حوالي 0.5-1.5 ميكرومتر. يتم تحديد حجم نقطة البؤر من خلال تصميم المجهر، وطول موجة الليزر، والخصائص الموضوعية، وإعدادات حالة وحدة المسح، وخصائص العينة. نطاق الإضاءة وعمق المجهر الميداني كبيران، في حين تركز إضاءة المجهر متحد البؤر على نقطة محورية آمنة على المستوى البؤري. الميزة الأساسية للمجهر متحد البؤر هي أنه يمكنه إجراء تقطيع بصري جيد على عينات الفلورسنت السميكة (حتى 50 ميكرومتر أو أكثر)، بسمك يتراوح من 0.5 إلى 1.5 ميكرومتر تقريبًا. يمكن الحصول على سلسلة صور الشرائح الضوئية عن طريق تحريك العينة لأعلى ولأسفل باستخدام محرك السائر ذو المحور Z - للمجهر. يتم التحكم في جمع معلومات الصورة ضمن مستوى آمن ولن تتداخل مع الإشارات المنبعثة من مواقع أخرى على العينة. بعد إزالة تأثير مضان الخلفية وزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء، تم تحسين تباين ودقة الصور البؤرية بشكل ملحوظ مقارنة بصور مضان الإضاءة الميدانية التقليدية. في العديد من العينات، تتشابك المكونات الهيكلية المعقدة لتشكل أنظمة معقدة، ولكن بمجرد جمع ما يكفي من المقاطع البصرية، يمكننا استخدام البرامج لإعادة بنائها في ثلاثة أبعاد. وقد استخدمت هذه الطريقة التجريبية على نطاق واسع في البحوث البيولوجية لتوضيح العلاقات الهيكلية والوظيفية المعقدة بين الخلايا أو الأنسجة.
